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ELISA相关重要概念介绍 ELISA相关重要概念介绍 PAGE / NUMPAGES ELISA相关重要概念介绍 ELISA 有关重要观点介绍 OD 值与 A 值：ELISA 比色结果的一般用通用光密度 （Oplical Density，OD） 来表示，现按规定用吸光度（ Absorbence，A）作为简称， OD 值及 A 值二者含义相同，都是指用酶标仪的比色结果。 单波长及双波长： 是指用酶标仪比色时，直接用底物的汲取波长读值，从前常用的底物 OPD 的汲取波长为 492nm，此刻常用底物的 TMB 的汲取波长为 450nm，这叫单波长读值；除此以外，为使所读的数值更正确，可再设置 一个参照波长，一般设为 630nm 或 620nm，以清除扰乱要素（如板底刮花）的影响，这叫双波长读值。 临界值（ CutOff ，C.O.）：是依据实验中阴阳性比较的数值计算出来，用来判断标本是阳性仍是阴性的数值。竞法法试剂中，小于等于临界值为阳性；其余原理的试剂，都是大于临界值为阳性。 S/C.O.值：是指标本（Sample）的 OD 值与临界值（Cut Off ，C.O.）的比值。用于判断能否为阳性或阳性的强弱 5. 空白比较： 起到调零的作用。调零是指全部标本孔及质控孔的 OD 值减去 空白比较孔的 OD 值，获得标本孔及质控孔的最后的数值。一般单波长读值 一定以空白调零（以清除扰乱） ，双波长读值不用。 阴性比较： 用于计算临界值，以判断标本的阴阳性。同时控制试剂盒质量特异性能否合格。 阳性比较： 控制实验的有效性和试剂盒的稳固性 （敏捷度），一般来讲假如阳性比较 OD 值小于必定的数值，实验将无效；有些试剂也用来计算临界值。 钩状效应（Hook Effect ）：在从前的免疫积淀反响中称为前带现象。 是指标本中待测抗原浓度相当高时，过度抗原分别和固相抗体及酶标抗体联合，而 不再形成夹心复合物，使得检测结果低于实质含量；如待测物为抗体，相同 可能会现此现象。常有于一步法的试剂中。钩状效应严重时甚至可能出现假 阴性结果。此刻厂家生产的一步法试剂中，都会把固相抗体或抗原及酶标抗 体或抗原调制成高浓度，抗原抗体比此浓度高的标本几乎不存在，所以出现 钩状效应可能性几乎为零。 试剂的特异性： 是指试剂对非特异性物质的鉴别能力。一般用试剂的真阴性率或假阳性率来表示。真阴性率越高试剂的特异性越好。假阳性率越高试剂的特异性越差。 试剂的敏捷度（敏感性） ：是指试剂对待测物的检出能力。一般分为剖析敏捷度和临床敏捷度两部分：①剖析敏捷度一般用待测物的最低检出量来表示。最低检出量越低，试剂的剖析敏捷度越高；用同一弱阳性质控品测定不同试剂时，吸光度值越高此试剂的剖析敏捷越高。②临床敏捷度指对临床真阳性样本的检出程度，真阴性率越高试剂的临床敏捷度越好，假阴性率越高 试剂的临床敏捷度越差。③剖析敏捷度和临床敏捷度不必定成正有关，即最 低检出量低的试剂不必定临床敏捷度就好（可能出现包被片断不全致使的漏 检）。④客户往常所说的敏捷度一般指剖析敏捷度。 精细度：是指派用某一试剂时，多次重复一份中阳性标本，实验的结果偏离均匀值的程度，偏离越小，实验的重复性越好，精细度越好。精细度一般 用 CV（变异系数）表示。此刻国家要求 ELISA 试剂生产厂家，把批内 CV% 控制在 15%之内。 稳固性：是指试剂在能达到规定标准的状况下的储藏时间， 决定了试剂的 有效期。 ELISA 产品一般采纳损坏性试验进行查验，即是将试剂寄存于 37℃ 保留，按期测定其敏捷度，特异性和精细度等指标，直到其质量指标开始下 降为不合格为止。往常以为 37℃保留一天相当于 2-8℃保留 2 月。 阳性率：检测总样本（ A 个）中阳性样本（ B 个）所占的比率，往常以百分比表示 A/B% 。 正确度：被丈量 (或剖析物 )的测定结果与被丈量真值之间的一致性。常表示为真值与测定结果之差，单位与结果单位一致，或为真值的百分比。 16．边沿效应 ：在使用 96 孔板的测定中， 出现外周孔显色较中心孔深的现象。 经研究证明在温育中的热力学梯度可能是根来源因：聚苯乙烯自己为不良热 导体，在实验室的惯例 ELISA 测定中，将板从室温（往常在 25℃左右）置于 37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度，导 致外周孔较中心孔升温更快。 所以使用水浴或在将反响溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温 育温度（如 37℃），就能够很简单地清除边沿效应， 而且可提升测定的重复性。 花板（跳孔）：试验后，空白和阴、阳性比较以及室内质控孔的结果（ OD 值）正常，而血液标本孔的  OD  值却比较高的状况（一般  OD  值≥，肉眼 可察看到淡淡黄色），标本的阳性率很高（一