基因工程及其应用课件 高一生物人教版必修二.pptVIP

　　被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？ 思考: 形成的黏性末端不同 不同的限制酶呢？ 具有。 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 练习使用EcoRI 剪切目的基因 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 目的基因 黏性末端 限制性核酸内切酶 分布：主要在微生物中。 特点：专一性和特异性，即识别特定脱氧核苷酸序列，切割特定位点。 切割部位：磷酸二酯键 结果：产生黏性末端（碱基互补配对）。 举例：大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ）能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将DNA 分子切断。目前已发现的限制酶有200多种。 两种来源不同的DNA用同种限制酶切割后，末端可以相互黏合，但是这种黏合只能使互补的碱基连接起来，脱氧核糖和磷酸交替链接而构成的DNA骨架上的缺口，则需要靠DNA连接酶来“缝合”，这种DNA连接酶就称“基因的针线”。 G C T T A A A A T T C G DNA连接酶 DNA连接酶 2.基因的“针线”—DNA连接酶 作用： 把脱氧核糖和磷酸交替链接而构成的DNA骨架上的缺口“缝合”起来，即催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键。 磷酸二酯键 使用DNA连接酶制作重组DNA分子 甲片段 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT 乙片段 GGCATCTTAA AATTCCGTAG 重组DNA分子 GGCATCTTAA AATTCCGTAG C T T A A G A A T T C G 重组DNA分子 （外源基因） ？如何将外源基因送入受体细胞呢？ 注：限制酶与连接酶作用的位点都是磷酸二酯键 3、基因的运输工具——运载体 目的基因 常用的运载体有两类： 1）质粒(最常用）（小型环状DNA) 2）噬菌体和某些动植物病毒 种类： 共同特点：都有侵染或进入宿主细胞的能力。 质粒 (plasmid) 大肠杆菌的质粒 质粒习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体（或拟核）以外能够自主复制的小型环状DNA分子。 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因，如四环素的标记基因。 质粒的特点： （1）细胞染色体或拟核之外能自主复制的很小的环状DNA分子。 （2）质粒的存在对宿主细胞的正常生活几乎没有影响。 （3）可以容易地从细胞中取出或放入。 （4）质粒的复制只能在宿主细胞内完成。 作为运载体必须具备哪些条件？ 1.能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2.具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3.具有某些标记基因，便于进行筛选。 如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。 在基因工程操作中，用肉眼无法看到载有目的基因的运载体是否真正进入细胞，这时，标记基因就为鉴别和筛选提供了标记。所谓的选择标记指的就是抗生素抗性基因，如抗四环素或抗氨苄青霉素基因。只要在培养基中加入四环素或氨苄青霉素就能够筛选已转化的细胞。 （三）基因工程的“四步曲” 提取目的基因 1 目的基因与运载体结合 2 将目的基因导入受体细胞 3 目的基因的检测和表达 4 基因工程基本步骤 1、获取目的基因 基因工程的第一步，是取得人们所需要的特定基因，也就是目的基因如抗虫基因，抗病基因、种子的贮存蛋白基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等都是目的基因。 要获得目的基因，主要有两条途径：一条是从供体细胞的DNA中直接分离基因，另一条是人工合成基因。 2、目的基因与运载体结合 　　用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。 细菌 供体细胞 取出质粒 取出DNA 用限制酶切断DNA 用连接酶连接目的基因 3、将目的基因导入受体细胞 将重组DNA导入受体细胞 扩增 3.将目的基因导入到受体细胞 （1）依据：主要是借鉴