第二章 细胞工程基本理论及其基本操作技术课件 高中生物竞赛.pptVIP

要求 1、掌握 组织培养的概念及相关 2、掌握植物组织培养技术中 营养条件有哪些 3、掌握培养基中必不可少 的六大类无机盐元素 4、了解各无机盐元素的生理功能 有机化合物 糖 类： 1）作用：既可作为C源，又可维持细胞的渗透压； 胁迫作用 2）原因：通常植物本身能进行光合作用，不需要从外部供给糖，但植物组织培养进行异养的情况下，大多不能进行光合作用来合成糖类，因此必须在培养基中添加糖，作为碳素来源和能量物质， 3）通常浓度大多在2-5%， 4）常用蔗糖，亦用麦芽糖、葡萄糖、果糖、纤维二糖、甘露糖等 传统的组培快繁技术中,是以糖作为植物体的碳源进行异养生长(异养型) ,由于培养基中糖的存在, 1）易造成微生物的污染,植株生根率低, 2）植物生长发育迟缓或死亡, 3）过度苗成活率低，即土壤移栽困难 从而造成了生产成本高。严重的制约了微繁殖规模化、商业化生产的发展。 无糖组培法（sucrose-free tissue culture ） 或光自养微繁 （Photoautotrophic micropropagation） 20世纪80年代末,由日本千叶大学古在丰树教授发明的了无糖组培快繁工厂化技术。 是一种全新的植物组织培养技术, 是环境控制技术和组培技术的有机结合。 其特点在于: 1）以CO2 代替糖作为植物体的碳源,利用工程技术手段调节组培微环境的空气、光照、湿度等影响因子,促进植物体自养生长 。 2）提高苗的质量和产苗率,缩短培养周期。 目前,中国、美国、英国、韩国等国家已将该项技术应用于种苗工业化生产中. 无糖组培法与传统组培法的主要区别 1）去除了糖的使用, 可以避免微生物的污染, 2）培养可以转入一种较大的容器中进行，节省了人力和材料成本： 大型容器内的CO2 浓度,光照强度,空气流动等环境因素容易调节,操作容易进行, 简化了操作过程,减少了人工操作的工作量,省略了传统组培法中所必须的耗材和药品,如聚乙烯封口膜、玻璃瓶、皮筋、蔗糖等。 无糖组培法 有试验证明,在大型容器中还可以利用塑料泡沫、纤维素、蛭石、成型岩棉等多孔性无机支持的材料替代价格较贵的琼脂,装入穴盘,放在大容器中,这些材料的价格远远低于琼脂的价格,且有的可重复使用,极大地降低了成本。 目前已有不少学者和公司致力于无糖培养法的相关设备的开发。如: 古在丰树、材真纪夫等研发了组培容器换气的透气滤菌膜,营养液循环大型容器和培养技术,侧光靠近照明技术及相应的光导纤维照明设备,新式全自动控制培养箱等。 节约成本的实例 Fig. 1. Schematic diagram of the temporary root zone immersion (TRI) bioreactor with forced ventilation system. 4、了解无糖培养技术中 什么时候应该从培养基中撤去糖 维生素类 肌醇 氨基酸类 嘌呤类 维生素：外植体开始，启动，能合成少量，但不能满足细胞正常生长需要 常用维生素: VB类水溶，人无法合成，促进物质代谢,糖、蛋白转变成能量。 维生素 外植体材料防止褐化，添加 100-500mg/L 肌醇 化学名称环己六醇。肌醇本身并没有促进生长的作用，但 它在糖类的相互转化、维生素、激素的利用等方面具有重要的促进作用，所以它能使培养物快速生长，对胚状体和芽的形成有良好的影响。 腺嘌呤 腺嘌呤是合成各种细胞分裂素的前体之一，外源添加腺嘌呤有利于细胞协调自身合成细胞分裂素，有利于细胞的分裂和分化，促进芽的形成和生长。 氨基酸 氨基酸是很好的有机氮源，可被细胞直接吸收利用。常用的氨基酸为甘氨酸及多种氨基酸的混合物，如水解酪蛋白、水解乳蛋白等。 要求： 1、掌握培养基中有机化合物的种类 2、了解维生素B类对植物细胞及人体的作用 3、了解其他有机化合物的作用 二、植物生长调节剂 （plant growth regulator PGR） 重要性： PGR是培养基中的关键物质 是植物细胞工程研究的重要的基本方法 借助PGR的合理使用，来控制各类植物细胞和组织的生长、分化、器官发生、胚胎发生等，来实现完整植株的再生。 1）在细胞工程研究中，对需要加以利用的细胞或经过遗传修饰的细胞，只有经过器官分化和植株再生后，在农业上才有利用价值。 2）细胞大量培养时，需要利用PGR来获得最大的细胞生物量和次生代谢产物的产量。 1、植物生长调节剂包括： 生长素、细胞分裂素、TDZ、赤霉素、脱落酸等。 1.1 生长素类： 用处（4点）： 主要作用在于愈伤组织的形成、胚状体的产生以及试管苗的生根，更重要的是配合一定比例的细胞分裂素诱导腋芽及不定芽的产生。 常用的生长素： IAA(吲哆乙酸)、NAA (奈乙酸 )