讲义文稿案例23重组dna简介.pptx

Recombinant DNA (Technology)Gene engineeringGenetic engineering-gene splicing, gene cloning, molecular cloning-process cutting a gene out of a DNA strand and inserting the gene into another DNA strand.基因工程：指按照人们的愿望，进行严格的设计并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和操作的，因此又叫作DNA重组技术(gene recombination)、基因拼接技术(gene splicing)、基因操作技术(gene manipulation)。基因工程的别名基因拼接技术或DNA重组技术操作环境生物体外操作对象基因操作水平DNA分子水平基本过程剪切?拼接?导入?表达实质基因重组结果人类需要的基因产物苏云金芽孢杆菌普通棉花(无抗虫特性)克隆与载体DNA拼接，导入抗虫基因(BT)棉花细胞(含抗虫基因)表达棉花植株(有抗虫特性)基因工程培育抗虫棉的简要过程Bacillus?thuringiensisInsecticidal crystal proteinDNA 重组技术的基本工具“分子手术刀”- 限制酶 “分子缝合针” - DNA连接酶 “分子运输车”-基因进入受体细胞的载体 基础知识常用工具酶克隆载体目的基因的获得基因与载体的连接-基因克隆重组DNA导入受体细胞表达载体及基因的表达重组DNA技术的应用Terms in common useDNA/Gene cloning基因克隆Vector载体(一般为质粒DNA)Gene engineering基因工程Gene manipulation基因操纵Recombinant DNA重组DNATransgene/Transgenic animal(plant) 转基因/转基因动(植)物cDNA/Genomic DNA library cDNA/基因组(总)DNA文库基本概念克隆（clone） 克隆化（cloning） DNA克隆（DNA cloning）分子克隆（molecular cloning）重组DNA （recombinant DNA） 工具酶 （tool enzymes） restriction enzymes （Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）目的基因（target gene)基因载体 （vectors）DNA克隆（基因克隆或重组DNA） 应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质（DNA）与载体DNA连接成具有自我复制能力的DNA分子，再通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，经扩增提取获得大量同一DNA分子的基因操作（技术）。基因克隆（分子克隆molecular cloning）--通过体外重组技术，将一段目的DNA经切割、连接插入适当载体，并导入受体细胞，扩增形成大量子代分子的过程。基因克隆的核心--体外重组(recombination) :人工将一段目的DNA插入一个载体的过程。基因亚克隆 是指将较大的克隆片段经酶切后，再将所有的小DNA片段与另一个载体连接转化的过程。DNA体外重组的特点DNA体外连接减少了DNA分子进入宿主细胞后遭受降解的危险，增加了转化效率。由于限制性内切酶产生的粘性末端在体外连接，使原来酶的识别序列在整个DNA维持完整性，有利于在重组子转化扩增以后再对外源基因的分离。连接时可以控制连接反应条件，有利于形成环状分子或者几个DNA片段头尾相连接的直线多联体。1973 Cohen第一例成功的克隆实验。1978 重组人胰岛素（rhinsulin）(第一个基因工程蛋白药物--Genentech公司 )。 1982 重组人胰岛素在英、美获准使用。1985 第一批转基因家畜(兔、猪和羊),中国转基因鱼。1993 基因工程西红柿在美国上市。1997 多利羊诞生--英国罗斯林研究所。1999.9 中国获准加入人类基因组计划，负责测定人类基因组全部序列的1%。2000.6.26 科学家公布人类基因组工作草图。2001.2.11 公布人类基因组基本信息。生物技术工程：基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程。抑制和调节多种激素的作用生长抑素 (Somatostatin, SS)9升大肠杆菌 培养液从动物脑中提取5 mg ---50万只羊脑基因工程体外重组重组子（杂合DNA）转化受体细胞筛选阳性克隆大量扩增，获得子代DNA基因克隆的技术路线 目的基因 载体 目的基因基因载体切接转重组体筛总体技术路线分表1973年Stan