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北工大微生物学第5章会计学第五章 微生物的生长微生物的生长微生物的繁殖发育-----------由生长到繁殖生物个体物质有规律地、不可逆增加，导致个体体积扩大的生物学过程。生长：生物个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。繁殖：生长是一个逐步发生的量变过程，繁殖是一个产生新的生命个体的质变过程。在高等生物里这两个过程可以明显分开，但在低等特别是在单细胞的生物里，由于细胞小，这两个过程是紧密联系又很难划分的过程。第一节:微生物生长的测定方法第二节:微生物的生长规律第三节:影响微生物生长的因素第四节:接种和培养第五节:控制微生物生长的方法第一节:微生物生长的测定方法? 细菌个体细胞一般太小，通常采用电子显微镜观测，但无法观测到整个生长的动态过程 真菌细胞相对体积较大，可采用显微镜观测和记录活细胞的整个生长过程，如使用微分—干涉相差显微镜、相差显微镜和荧光显微镜等进行。 测定群体微生物细胞数目的增加测定群体微生物细胞物质量的增加一个微生物细胞合适的外界条件，吸收营养物质，进行代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用个体的生长原生质的总量（重量、体积、大小）就不断增加如果各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，引起个体数目的增加。群体内各个个体的进一步生长群体的生长微生物生长：单位时间里微生物数量或生物量（Biomass）的变化个体计数群体重量测定群体生理指标测定微生物生长的测定：评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响；评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制(或杀死)作用的效果；客观地反映微生物生长的规律；一.微生物细胞量的测定1. 干重法 将微生物菌体或离心得到的细胞沉淀物置100—105℃的烘箱中干燥至水份去除，然后再称重。 2.细胞成分含量法(氮量法----14%) 如蛋白质、还原糖、总糖、核酸等含量的测定。因为每个细胞成分的含量是一定的，单位体积培养液中微生物群体细胞数目越多，总的细胞成分的含量就越多。蛋白质总量=含氮量×6.25细胞总量=蛋白质总量÷65%3. 浑浊度法在一定范围内,小颗粒散射的光量与浓度成正比.光束穿过细胞悬液,通过的光量由于散射而减少,因而可以作为细胞密度测定,这种测定通常采用光电比色计或分光光度计进行.在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度(optical density, 即O.D.)表示菌量。实验测量时应控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。二. 细胞数的测定1.血球计数板法2. 平皿菌落计数法采用培养平板计数法要求操作熟练、准确，否则难以得到正确的结果：样品充分混匀；每支移液管及涂布棒只能接触一个稀释度的菌液；同一稀释度三个以上重复,取平均值；每个平板上的菌落数目合适，便于准确计数；3. 薄膜过滤平皿计数法当样品中菌数很低时，可以将一定体积的湖水、海水或饮用水等样品通过膜过滤器，然后将膜转到相应的培养基上进行培养，对形成的菌落进行统计。3. 薄膜过滤平皿计数法主要适用于只能进行液体培养的微生物，或采用液体鉴别培养基进行直接鉴定并计数的微生物。对未知样品进行十倍稀释，然后根据估算取三个连续的稀释度平行接种多支试管，对这些平行试管的微生物生长情况进行统计，长菌的为阳性，未长菌的为阴性，然后根据数学统计计算出样品中的微生物数目。生理指标法微生物的生理指标，如呼吸强度，耗氧量、酶活性、生物热等与其群体的规模成正相关。样品中微生物数量多或生长旺盛，这些指标愈明显，因此可以借助特定的仪器如瓦勃氏呼吸仪、微量量热计等设备来测定相应的指标。特点与应用方法血球计数板法 较快速简便，但较费时总细胞数薄膜过滤染色法 快速简便，适于含菌数很低的空气、水等中的总菌计数 平皿菌落计数法 简易价廉，但花费时间较长，不能立刻知道结果活细胞数薄膜过滤平皿法 灵敏度高, 不用于高密度培养物，不能立刻知道结果细胞湿重法较为简便，但含水量不定，准确度差细胞干重法较为费时，易受颗粒杂质干扰，敏感度低细胞成分含量法如测定蛋白质、核酸、还原糖的含量等微生物生长测定方法比较测定细胞数目测定物质量比浊法 快速简便，敏感度低，适于不发酵液或液体中的快速 总细胞数估计，但需事先标定第二节 微生物的生长规律 微生物的生长表现在微生物的个体生长与群体生长两个水平上。 微生物个体生长表现为个体质量和体积的增加。 微生物群体生长是以微生物细胞的数量或微生物 群体细胞物质量的增加作为生长的指标。 因而要了解微生物的生长规律，就要了解微生物的个体生长和群体生长两个方面。单细胞微生物个体生长表现为细胞体积的增加 和细胞内物质含量的增加两个方面, 当细胞生长到一定时期，就分裂成为两个子细胞。多细胞微生物个体生长则反映在构成个体的细胞数目