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枸杞中苦味物质分离鉴定及其生物合成相关酶研究 枸杞是我国历史悠久的药食同源品种,味甘、平,归肝、肾经,具滋补肝肾, 益精明目功效。2015 版《中国药典》收录枸杞来源为茄科植物宁夏枸杞Lyciu barbarum L.的干燥成熟果实。 现代药理研究表明枸杞具有抗氧化、抗衰老、降血糖等多种活性,药用价值 广泛。不仅如此,枸杞还是保健品、化妆品、食品饮料等行业的优质天然原料, 也是普通百姓的滋补茶蔬,具有很高的经济价值。 宁夏枸杞具有较强的耐盐和耐旱性,主要栽培于宁夏、青海、甘肃、新疆等 干旱和半干旱的西部省市。其中宁夏产区栽培历史最为悠久,栽培面积大,是枸杞 的道地产区,其自主选育的“宁杞1 号”、“宁杞5 号”和“宁杞7 号”因坐果率 高,果实甘甜得到广泛推广和栽培。 在华北地区如河北巨鹿、天津静海等地区有少量栽培品中华枸杞 L.chinense M.和北方枸杞 L.chinense Mill.var.potaninii(Pojark.)A.MLu, 因其果实口感具有苦味,市场占有率较低,仅在周边地区流通。宁夏枸杞的野生近 缘种云南枸杞L.yunnanense Kuang et A.M.Lu、截萼枸杞L.truncatu Y C.Wang、 黑果枸杞L.ruthenicum Murr.和新疆枸杞L.d yemum Pojark.种群都较少,分布 较为稀疏零散。 虽然大部分野生来源的枸杞近缘种果实也作为枸杞使用,但是缺乏足够的科 学证据证明野生苦味枸杞和栽培甜味宁夏枸杞的物质基础和药理作用一致。苦味 物质作为植物对抗病虫害的武器,在植物抵御植食性动物和病原微生物时发挥着 巨大作用。 野生环境中,枸杞的果实个头较小、苦味显著,通常具有较强的抗病虫害能力。 我们认为枸杞在漫长的由野生到栽培的驯化过程中,由于人工选择不断累积,果 实口感变得越来越甜,但也导致栽培品的遗传背景日益狭窄。 实际生产中,宁夏枸杞的传统栽培产区,栽培历史长,病虫害种类多。野生枸 杞长期处于野外恶劣环境,在自然选择中形成了丰富的遗传多样性,具有很多优 良基因,特别是抗虫害基因和耐非生物胁迫的基因。 开展野生枸杞的研究,挖掘其有益基因对于改良枸杞栽培和进行种质创新具 有重要意义。枸杞的现代研究,主要集中于导致果实甜味的游离糖类及枸杞多糖 的化学分析及药理、药效研究。 或者是聚焦枸杞中果实红色或者橙红色的色素类物质即类胡萝卜素类物质。 对枸杞中的苦味缺乏相关的研究和报道。 基于以上认识,本研究针对枸杞中的苦味开展了以下工作:1、本草古籍中枸 杞性味变迁规律的考辨认真查阅本草古籍中有关枸杞的文字描述,辅以古籍图像。 结合枸杞原植物的形态,产地变迁等情况进行分析考证。 梳理出枸杞性味由苦寒演变为甘平的规律。考证后发现,在主流医学典籍中 枸杞性味的记载存在苦微寒,甘平,甘苦,甘苦寒交替出现,甘温,至民国以来普遍 认为甘平的历史变迁过程。 枸杞原植物来源的不同、产地的变迁、栽培技术推广、生产技术(如灌溉方 式的差异)、口尝者亲身感受的差异、成书年代等因素都可能对枸杞的性味记载 产生影响。总之,枸杞的性味从秦汉时期《神农本草经》始载至今,由“苦”演变 为“甘”。 对枸杞的性味变化及其可能原因的考证为枸杞中苦味的现代研究提供了参 考和依据。2、苦味枸杞与甜味枸杞的感官评价与比较代谢组差异研究基于食品 学中经典的感官评价方法和统计分析手段,完成了对苦味枸杞和甜味枸杞口感上 的客观评价,并进行了具有统计学意义的区分。 进而建立了苦味枸杞和甜味枸杞基于UPLC-Q-TOF-MS 方法的代谢谱差异 析。构建了枸杞属化学成分质谱数据库(355个化合物),通过对苦味枸杞和甜味 枸杞的PCA 和OPLS-DA 分析,筛选获得23 个符合筛选条件的化合物作为差异代谢 物,根据主要差异化合物的多级质谱裂解规律,推导并鉴定了化合物。 其中5 个化合物在甜味枸杞中相对含量低甚至检测不到。此5 个化合物含有 相似的碎片离子、类似的裂解规律,推导为同一类化合物并可能为新化合物。 根据质谱信息,参考已构建的枸杞属化学成分数据库和文献报道,初步鉴定 出11 种关键差异代谢物,其中包含2 种有机酸类化合物,1 类黄酮类化合物,1 种 为羟基肉桂酸类化合物,7 种含氮化合物。推导7 种含氮化合物中1 种为二咖啡 酰精胺类化合物,6 种二咖啡酰亚精胺类化合物。 3、苦味枸杞化学成 析及苦味评价综合运用各种柱色谱(大孔树脂、