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电镜练习试题及参考包括答案 电镜练习试题及参考包括答案 PAGE / NUMPAGES 电镜练习试题及参考包括答案 一、电镜练习题及答案 一、透射电镜标本取材的基本要求并简要说明。 答：取材的基本要求以下： 组织从生物活体取下此后， 假如不立刻进行实时固定办理， 就有可能出现缺血缺氧后的细胞超微构造的改变， 如细胞出现细胞器变性或溶解等现象， 这些都可造成电镜察看中的人为设想， 直接影响察看结果剖析， 甚至致使实验失败。 别的，因为办理不妥造成组织微生物污染，致使细胞的超微构造构造遭到损坏。 所以，为了使细胞构造尽可能保持生前状态， 取材成败是重点， 取材成功的重点在于操作者一定要注意掌握“快、小、冷、准”四个取材重点。 ．快：就是指取材动作要快速， 组织从活体取下后应在最短时间 ( 争取在 1～ 2 分钟以内 ) 投入前固定液。关于实验动物，最幸亏断血流、气绝以前就进行取 材，免得缺血缺氧后使细胞代谢发生改变而损坏细胞的超微构造。自然，最好是 采纳灌输固定法。 为了使前固定的成效更佳， 组织块要充足和固定液混淆， 应采纳振荡固定 10 分钟以上，有条件的可采纳微波固定法固定。 ．小：因为常用的固定剂浸透能力较弱，组织块假如太大，块的内部将不可以 3 获取优秀的固定。所以所取组织的体积要小， 一般不超出 1mm。为便于定向包埋，可将组织修成大小约 1mm×1mm×2mm长条形。 ．冷：为了防备酶对自己细胞的酶解作用， 取材操作最幸亏低温 (5 ℃～ 15℃) 环境下进行， 这样能够降低酶的活性， 防备细胞自溶。 所采纳的固定剂以及取材器材要早先在冰箱 (5 ℃）中寄存一段时间。 ．准：就是取材部位要正确， 这就要求取材者对所取的组织解剖部位要熟习，一定取到与实验要求有关的部位， 不一样实验组别间要取同样部位， 如需要定向包埋的标本，则要作好定向取材工作。 别的，还要求操作动作柔和，娴熟，尽量防止牵拉、伤害与挤压对组织造成的人为损害。 二、 什么是瑞利准则？电镜与光镜在原理上有何相像和不一样之 处？ 答： 1、光芒经过二个比较凑近的小孔时，这二个小孔的衍射图会重叠在一同。 当一个衍射图的中央亮斑正好落在另一个衍射图的第一暗环中心时， 这二个点刚能够辩解。这就是显微镜辩解本事的瑞利准则。 2、相像点：光学显微镜是利用玻璃制作的透镜对光进行折射，将一物点发出不一样角度的光芒最后汇聚成一个像点。电子显微镜是以电子束作为光源，利用电磁透镜产生的电场或磁场折射电子束， 并经过电子束轰击荧光屏激发荧光而达到成像目的。 不一样点：光镜的照明源是可见光， 而电镜是用电子束照明。 光镜的透镜用玻璃制成，而电镜的透镜是轴对称的电场或磁场。 三、 简述透射电镜及扫描电镜样品制作流程 答： 1、透射电镜样品制作流程为取材——漂洗（生理盐水）——前固定（ 2.5% 戊二醛， 4oC冰箱 2 小时以上）——漂洗（ 0.1M 磷酸缓冲液， 3 次， 45 分 钟）——后固定 (1%锇酸 1 小时左右 ) ——漂洗（ 0.1M 磷酸缓冲液， 3 次， 45 分钟）——块染（ 1%醋酸铀 2 小时）——梯度脱水（ 50%、70%、80%、90%丙酮各 15 分钟， 100%丙酮 2 次，各 10 分钟） ——浸透 （丙酮：包埋液 =1：1，37 oC 烘箱 2 小时；丙酮：包埋液 =1：4， 37oC烘箱留宿；纯包埋液 45oC 烘箱 2 小时）——包埋聚合（ 45oC烘箱 3 小时， 65oC 烘箱 48 小时）。 、扫描电镜样品制作流程为取材（做好样品察看面的标记）——漂洗（生理盐 水或缓冲液）——固定（ 2.5%戊二醛 2 小时以上）——漂洗（ 0.1M 磷酸缓冲液，3 次，45 分钟）——后固定（1%锇酸， 2 小时） ——脱水 （ 50%、70%、80%、90%、95%各 15 分钟，换醋酸异戊酯 15 分钟或叔丁醇 15 分钟）——干燥（零界点干燥或冷冻干燥）——镀膜（真空镀膜仪或离子溅射仪） 四、常用的化学固定方法有哪些？ 答 ; 常用的化学固定方法有 1、浸泡固定法（也称组织块固定）：就是将组织块直接浸泡入固定液中间进行 固定。 2、游离细胞固定法： 合用于培育细胞、四周血、骨髓、胸腹水或其余溢出液。如为贴壁生长的培育细胞，应先用橡皮刮子将细胞从培育管壁上轻轻刮下，或用酶消化，使细胞离开管壁。 3、原位固定法： 就是在组织未取下以前， 在组织器官本来的地点进行预固定的方法。 原位固定可分为点滴固定法和注射固定法两种。 点滴固定法：就是将实验动物麻醉后裸露出所需的器官表面， 当心地剥开包膜，将预冷的固定液直接滴在组织的表面上， 并保持固定液适合浓度不使挥发干燥。 注射固定法：就是将实验动物麻醉后，将固定液用细注射针直接注射到所需固定的组织中或空腔