植物花药和花粉培养 PPT.pptxVIP

植物花药和花粉培养;植物花药/花粉培养历史;概念:;花药或花粉培养的作用:;例子: 二倍体供体植株基因型为AaBb,若要从后代中选择基因为AAbb的纯合单株 常规方法: AAbb出现的概率为1/16,同时不能将AAbb与Aabb、aaBb区分开。 ;例子: 二倍体供体植株基因型为AaBb,若要从后代中选择基因为AAbb的纯合单株 单倍体方法: AAbb出现的概率为1/4。; 植株不受显隐性的影响,在诱变育种中能在当代及时获得突变个体,加倍后成为稳定的纯系。 ;2、物种进化研究 可探究亲本染色体组的构成。分析单倍体植物减数分裂时,形成二价体的数目与形状,能确定染色体组内是否存在同源染色体。 3、遗传分析 单倍体植株中基因不受显隐性的影响,每一个基因的作用均能表现出来。能用来研究基因的性质及其作用。还可用于基因的剂量效应分析。 4、构建连锁图谱 双单倍体(DH)群体是永久性群体,能有效地用于遗传图谱的构建。 5、用于遗传转化 能直截了当表达外源基因,不受显隐性影响。 ;第二节 花粉孢子体发育途径(雄核发育);一、花粉发育的时期;二、雄核发育途径;1、雄核发育与P花粉的形成 P-花粉:具胚胎发生潜能的花粉。也称小花粉(S-花粉)或不染色花粉(NS-花粉) 2、雄核发育与饥饿处理 饥饿处理改变了小孢子的配子体发育方向,启动雄核发育。;2--细胞花粉;;胚状体发育途径;通过胚状体途径再生形成小植株;胚状体发育途径;愈伤组织发育途径;愈伤组织转接种到再生培养基;第三节 花药与花粉培养方法;一、花药培养;二、花粉培养;梯度离心前 (小孢子形态、活力不一致);(二)花粉培养方式 1、平板培养 花粉置琼脂固化培养基上培养。 2、液体培养 花粉悬浮在液体培养基中培养,需震荡,以利通气。 3、双层培养 花粉置固体-液体双层培养基上培养。培养基制作方法:先铺一层琼脂固体培养基,凝固后,在表面加入少量液体培养基。 4、看护培养 利用花药或花药愈伤组织释放出的活性物质促进花粉小孢子发育。 5、微室培养 利用小的盖玻片与凹穴载玻片形成微室进行花粉培养 6、条件培养基培养 利用培养过花药的液体培养基或含失活花药提取物的培养基上培养。花药条件培养基、子??条件培养等。;看护培养图解;三、白化苗现象;(一)白化苗产生的影响因素及机理 1、内因 供体植株基因型(如籼稻比粳稻白苗率高)、花粉发育时期。 2、外因 低温预处理、培养基成分(低浓度2,4-D与蔗糖)、培养条件(提早愈伤组织转分化培养)。 3、机理 核基因起关键作用,导致质体DNA缺失(估计受与核基因控制),产生白苗。另外离体培养中的高频率无性系变异也估计是原因之一(染色体上估计存在易变位点)。 ;(二)白化苗的控制 通过对花粉发育时期(单核中晚期)、预处理(低温、暗培养)、培养基成分(低浓度的蔗糖+麦芽糖)等因素(提早进行转分化培养)进行调控。;四、影响花粉与花药培养的因素;芸苔属植物Brassica napus不同基因型的小孢子产胚率比较;(二)供体植株生长条件与生理状态 1、植株生长条件 光温等因素均能影响花药培养力。一般 处于适宜生长条件(如温室中)较好。但物种间存在差异。 2、植株生长时期 一般是开花始期优于开花末期。 3、P花粉的频率 不同温度(低温)、日照时数(短日照)、氮饥饿及生长物质处理(乙烯利/诱导雄性不育)等可提高P花粉的数量 。 ;(三)花粉发育时期 小孢子发育时期对诱导雄核发育特别重要。;四分体: 醋酸洋红染色;单核晚期;一般而言,单核期(第一次有丝分裂前)对诱导反应最敏感,为最佳培养期。;不同物种诱导胚胎发生的最佳小孢子发育时期;对不同发育时期的花药进行培养测试 确定最佳小孢子发育时期的形态特征 注意形态特征会因品种、发育状态、环境条件的变化而发生变化 ;(四)预处理 预处理是小孢子培养成功的前提条件 预处理目的:是改变小孢子的发育方向,使尽估计多的小孢子从配子体发育途径转向孢子体发育途径(即成为具胚胎发生潜力的小孢子)。适当的预处理能使绿苗产量大量增加。 预处理方法:主要是对花药进行适度的逆境处理,包括低温、高温、化学物质、离心、射线等。 ;1、高低温处理 低温预处理(花粉饥饿):指在接种之前将材料用0℃以上低温处理一段时间后再接种。应用较多。处理温度一般在1-14℃,时间从几小时至几十天不等。不同作物所用的预处理温度及时间差异较大。不同的处理温度需要不同的时间。 例子:小麦穗子培养前4℃预处理几天,花药培养效率显著提高。 十字花科未经低温预处理的花蕾,每花药产胚数为4、39个,6-9℃处理1天,产胚数提高到61、4个,预处理4天后,胚状体产量降为