DNA的粗提取与鉴定课件 高二下学期生物人教版选修一.pptVIP

复习巩固: (1)如何观察DNA和RNA在真核细胞中的分布情况? (2)真核细胞DNA的主要存在场所? (3)证明DNA是遗传物质的三个经典实验? (4)DNA分子双螺旋结构模型的提出者是谁? (5)DNA分子双螺旋结构模型的主要特点? 1、DNA分子由两条链组成,这两条链按反向平行的方式盘旋成双螺旋结构. 2、DNA分子中的磷酸和脱氧核糖交替连接.排列在外侧,构成基本骨架,碱基排列在内侧. 3、DNA分子两条链上的碱基通过氢键连接成碱基对. §5.1 DNA的粗提取与鉴定 DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 当氯化钠的物质的量浓度为2mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为0.14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。 一、基础知识 DNA不溶于酒精溶液， 但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 将DNA与蛋白质进一步分离。 （一）DNA的溶解性 （二）、 DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ① 蛋白酶——水解蛋白质， 对DNA没有影响 ② 高 温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃ 而DNA在80℃以上才会变性 ③ 洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对DNA没有影响 1、试剂： （三）DNA的鉴定 条件： 二苯胺 沸水浴条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色 沸水浴 现象： 甲基绿 （绿色） 想一想 必修1还有什么可鉴定DNA？ （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 （三）除去滤液中的杂质(纯化) （四） DNA的析出与鉴定 二、实验设计 （一）实验材料的选取 1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材料） 2、原则：选用DNA含量相对较高、容易提取的生物组织。 鸡血 3、合适的材料： （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、动物细胞 2、植物细胞 ——容易破碎 ——需要溶解细胞膜 鸡血细胞溶液： 加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液 想一想：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体， 水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂； 加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂，从而释放出DNA ① 加入一定的洗涤剂和食盐 ② 充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 想一想：洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 洗涤剂——离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放 食 盐——NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中 经研磨可破碎细胞壁，使细胞核内的DNA释放。若研磨不充分，会使提取的DNA量变少，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。 为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理 讨论：滤液/研磨液中可能含有哪些成分？ 答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质 想一想：研磨的目的是什么，如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 1. DNA的溶解性 （三）除去滤液中的杂质 方案一、在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再加入蒸馏水，调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤除去溶液中的杂质，在用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。 为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质 答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐溶液中不能溶解的杂质；用低盐溶液使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质 讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？ 方案二：利用蛋白酶分解杂质蛋白，使提取的DNA与蛋白质分开； 方案三：利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，使蛋白质变性，与DNA分离 方案二、直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10～15分钟。 方案三、将滤液放在60～750C的恒温水浴箱中保温10～15分钟。 2、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 （四） DNA的析出与鉴定 与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体积分数95％)，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物 ——粗提取DNA 用璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水 1、DNA的析出 2. DNA的鉴定