一种核酸杂交化学发光检测方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107058584 A (43)申请公布日 2017.08.18 (21)申请号 201710424227.2 (22)申请日 2017.06.07 (71)申请人 浙江殷欣生物技术有限公司 地址 311100 浙江省杭州市余杭经济技术 开发区新颜路22号501D (72)发明人 黄宝福　章喜超　章晓媛　叶德　 王哲　 (74)专利代理机构 嘉兴永航专利代理事务所 (普通合伙) 33265 代理人 侯兰玉 (51)Int.Cl. C12Q 1/68(2006.01) 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图1页 (54)发明名称 一种核酸杂交化学发光检测方法 (57)摘要 本发明涉及一种核酸检测方法，特别涉及一 种核酸杂交化学发光检测方法，属于生物技术领 域。本发明方法通过基质、捕获核酸序列、目标核 酸、标记生物素的信号核酸序列、标记链霉亲和 素的微球和生物素-碱性磷酸酶、发光底物等对 目标核酸进行特异性检测。本发明通过捕获核酸 序列将目标核酸杂交捕获，再经过信号核酸序 列、微球、生物素-亲和素以及碱性磷酸酶的活性 即可实现信号放大，从而检测到目标核酸的信 号。相对于PCR技术需要扩增，本发明在不增加检 测物浓度的前提下实现目标核酸的检测，且具有 稳定性好，成本低，检测速度快，对环境要求低等 A 优点。 4 8 5 8 5 0 7 0 1 N C CN 107058584 A 权　利　要　求　书 1/1 页 1.一种核酸杂交化学发光检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤： （1）根据目标核酸的序列设计捕获核酸序列和信号核酸序列，其中捕获核酸序列5’端 进行氨基修饰，信号核酸序列5’标记生物素； （2）将捕获核酸序列固定到基质上； （3）通过核酸杂交反应，捕获核酸序列和待测目标核酸结合； （4）通过核酸杂交反应，标记了生物素的信号核酸序列和结合在捕获核酸序列上的待 测目标核酸结合； （5）通过生物素-亲和素的特异性结合反应，把标记了链霉亲和素的微球结合到信号核 酸序列上； （6）通过生物素-亲和素的特异性结合反应，生物素-碱性磷酸酶和微球上的链霉亲和 素结合； （7）通过上述反应固定到基质上的生物素-碱性磷酸酶和发光底物反应，通过化学发光 分析仪读取结果，根据检测值和空白对照值的差异来判断待测的样本中是否含有目标核 酸。 2.根据权利要求1所述的核酸杂交化学发光检测方法，其特征在于：所述的微球是聚苯 乙烯(PS)、交联聚苯乙烯/聚二乙烯基苯  (P[S/DVB])或聚甲基丙烯酸酯(PMMA) 微球，微球 的直径为50-500nm。 3.根据权利要求1所述的核酸杂交化学发光检测方法，其特征在于：所述捕获核酸序列 和目标核酸的特定片段互补，且长度在15-50个碱基。 4.根据权利要求1所述的核酸杂交化学发光检测方法，其特征在于：所述信号核酸序列 和目标核酸的特定片段互补，且长度在15-50个碱基。 5.根据权利要求1所述的核酸杂交化学发光检测方法，其特征在于：所述基质是微孔 板、微球、玻片、硅片或微流体芯片。 6.根据权利要求1或5所述的核酸杂交化学发光检测方法，其特征在于：当基质是氨基 修饰的微孔板则通过戊二醛固定，当基质是羧基修饰的微球时，通过1-乙基