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硫酸-苯酚法测定多糖提取工艺 摘要：以甜茶多糖的得率作为评价指标,硫酸-苯酚法测定多糖含量,采用正交设计法,对料液比、提取温度及提取时间3个因素进行考察,优化多糖提取工艺参数。优化后的提取工艺为:提取时间为20 min,提取温度为80℃,提取料液比为1∶70,在此条件下甜茶茶多糖的得率达17.87%,工艺稳定,是较为理想的甜茶多糖提取工艺。 甜茶，又名多穗石柯(Lithocarpus polystachyus (Wall.) Rehd)，壳斗科石柯属植物1 材料与设备1.1 材料甜茶：购于贵州省瓮安县猴场镇；浓硫酸；苯酚；无水乙醇；葡萄糖。1.2 设备数显恒温水浴锅：HH-S6型，北京科伟永兴仪器有限公司；电热恒温水槽：DK-80，上海齐欣科学仪器有限公司；鼓风干燥箱：GXZ-9140MBE，上海博讯实业有限公司医疗设备厂；分析天平：CP214，奥豪斯仪器(常州)有限公司；粉碎机：ZA-2型，金坛市科析仪器有限公司；循环水真空泵：SHB-IIIS型，郑州长城工贸有限公司；出人员型超纯水机：FCR2002-UF-P型，青岛富嘞姆科技有限公司；冷凝管；圆底烧瓶；试管；移液管；洗耳球；烧杯；量筒；胶头滴管；锥形瓶；容量瓶；抽滤瓶。2 方法2.1 标准溶液的制备和绘制用苯酚-硫酸法测定多糖含量2.2 样品的制备将甜茶用粉碎机粉碎，过40目筛，放于烘干机中烘干，再将烘干后的茶叶加适量80%的无水乙醇，95℃水浴回流1 h，趁热抽滤，滤渣用80%的热乙醇(10 m L×2)，将滤渣烘干至横重备用。2.3 单因素试验2.3.1 提取时间对提取率的影响分别精确称取2.2项下的样品1 g于7个圆底烧瓶中，加100m L蒸馏水，在100℃下分别浸提15 min、20 min、25 min、30 min、35 min、40 min、45 min，抽滤，浸提次数固定为两次，滤渣用热蒸馏水洗涤(10 m L×2)，将滤液分别倒入250 m L容量瓶中并加蒸馏水定容至刻度，再分别移取1 m L滤液于100 m L容量瓶中定容至刻度，摇匀备用。2.3.2 提取温度对提取率的影响分别精确称取2.2项下的样品1 g于7个圆底烧瓶中，加100m L蒸馏水，分别在50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃，25 min下浸提两次，抽滤，滤渣用热蒸馏水洗涤(10 m L×2)，将滤液分别倒入250 m L容量瓶中并加蒸馏水定容至刻度，再分别移取1 m L滤液于100 m L容量瓶中定容至刻度，摇匀备用。2.3.3 料液比对浸提滤的影响分别精确2.2项下的样品1 g于7个圆底烧瓶中，分别加50m L、60 m L、70 m L、80 m L、90 m L、100 m L在90℃、25 min下浸提两次，抽滤，滤渣用热蒸馏水洗涤(10 m L×2)，将滤液分别倒入250 m L容量瓶中并加蒸馏水定容至刻度，再分别移取1 m L滤液于100 m L容量瓶中定容至刻度，摇匀备用。2.4 正交试验根据单因素试验的分析结果，对各个因素进行正交试验设计2.5 甜茶多糖含量的测定取2 m L甜茶多糖提取稀释液于试管中，再分别加入1 m L 6%的苯酚和5 m L的浓硫酸，立即摇匀，冷却至室温，移入比色皿中，于490 nm波长处测定吸光值，根据测得的标准曲线方程计算甜茶中多糖的浓度，经进一步计算即得多酚提取得率。式中：W为甜茶多糖得率，%；C为测定多糖质量浓度，mg/m L;n为稀释倍数；V为供试液体积，m L;m为甜茶质量，mg。3 结果与分析3.1 葡萄糖标准曲线以吸光度值(A)为纵坐标，标准溶液浓度(C)为横坐标，进行线性回归，得到回归方程式为A=16.73958C+0.09871，线性范围为0～0.0028μg/m L。3.2 甜茶多糖提取工艺的单因素试验3.2.1 浸提时间对甜茶多糖提取率的影响由图2可知，提取时间在15～25 min区间里，随着浸提时间的增加浸提滤也在增加，在25 min时多糖提取率最高，超过25 min后多糖提取率开始下降，然后逐渐平缓。所以选择25 min为最适浸提时间。3.2.2 提取温度对甜茶多糖提取率的影响由图3可知，提取温度在50～70℃区间内，随着温度的升高多糖提取率也在升高，在70～80℃区间温度开始下降，在80～90℃区间里再次开始上升，在90℃时多糖提取率最高。因此选择90℃为最适提取温度。3.2.3 料液比对甜茶多糖提取率的影响由图4可知甜茶多糖的提取率随着料液比的增加而增加，当料液比为1∶70(g/m L)时，多糖提取率最高，料液比超过1∶70(g/m L)后提取率开始下降。因此选择料液比1∶7