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公共场所茶具微生物检验方法 大肠菌群测定 GB/T 18204.3--2000 1 定义：大肠菌群 指一群在37℃、24h能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌痒的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 该菌主要来源于人畜粪便，故以次作为粪便污染指标来评价公用毛巾、床上卧具的卫生质量。 2 操作步骤 2.1 采样方法 2.1.1 随机法：随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。 2.1.2 涂抹法：用测定细菌总数时采集的样品，无需重采。 2.1.3 纸片法：用灭菌生理盐水湿润5cm×5cm大肠菌群快速测定纸片两张，分别贴在毛巾、床上卧具规定部位和面积范围内，约30s后取下，置于无菌塑料袋内。 2.2 检验方法 2.2.1 发酵法 2.2.1.1 用测定细菌总数剩余的检样，倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中。置36℃±1℃培养箱内培养24h。 2.2.1.2 观察是否产酸、产气，若有变黄和气体产生，该管推测是检验阳性。如不产酸、产气则为大肠菌群阴性。 2.2.1.3 自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，转种伊红美蓝琼脂平板上，置36℃±1℃培养箱培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实性试验。 2.2.1.4 在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行染色镜检； 同时接种乳糖发酵管，只36℃±1℃培养24h。 2.3 纸片法将已采样的纸片置36℃±1℃培养箱内培养16～18 h，观察结果。