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艾滋病实验室检测管理与设备维护 河北省疾病预防控制中心 性病艾滋病预防监测中心赵翠英HIV抗体检测的目的 监测:以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。诊断:以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。 血液筛查: 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 HIV抗体检测的要点筛查试验阳性不能出阳性报告。严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。严格按照试剂盒说明书操作。注意防止样品间交叉污染。常规程序初筛-复检-确认 复检： 对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂 和另外一种不同原理或不同厂家的筛 查试剂重复检测。如两种试剂复测均 呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性； 如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送 艾滋病确认实验室进行确认。HIV抗体筛查试验流程图 HIV抗体确认试验流程图 一、HIV抗体诊断临床上实际应用的是测定特异性HIV抗体，包括初筛和确认两个方面。HIV抗体一般在感染后几周逐渐出现，可延续至终身，是重要诊断依据，但是从感染到血清抗体阳转有一段窗口期，平均为1到3个月，还有一小部分比例的HIV感染者出现迟缓反应，95%以上HIV-1感染者产生抗体的时间是在感染后6个月以内。常用样品主要为血液此外还可用唾液检测HIV（Orasure，如Salivacard），尿液检测HIV抗体 。常用方法酶联免疫吸附试验（ELISA）明胶颗粒凝集试验（PA）斑点免疫试验（或免疫层析）：胶体金或胶体硒双抗原夹心ELISA试验原理 ▲ 此类试验比较敏感和特异，可检测血清中的IgA、IgM、IgG抗体。 ▲ 将HIV -1/2混合抗原包被在微孔板底部。? “一步法”--实验时加入待检血清和辣根过氧化物酶标记HIV-1/2混合抗原? “二步法”--实验时先加入待检血清，温度处理后，再加酶标记HIV-1/2混合抗原双抗原夹心ELISA试验原理▲ 温度处理后洗涤。待检血清中如有特异性抗体，即将包被抗原和酶标记的抗原桥联在一起，如无抗体，通过洗板而洗去酶标记的混合抗原。加入的底物同被桥联抗原上的酶发生颜色反应，指示抗体存在，如无抗体参与则无显色。▲ 实验中设阴性对照和阳性对照。明胶颗粒凝集试验(PA)原理 以HIV抗原致敏粉红色明胶粒子(载体)。这种致敏载体和血清中HIV抗体相遇被桥联而出现肉眼可见的凝集反应,非致敏的明胶粒子因无抗原参与,则不发生凝集。如果试验中的未致敏粒子对照出现凝集，即提示血清中含非特异性凝集因子，需用未致敏粒子吸附处理，重新做试验。 目前已有HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA试剂（AFD HIV 1/2 PA）和HIV-1、HIV-2抗原分别致敏的PA试剂（AERODIA-HIV-1/2）。前者可用于HIV1/2的筛查，后者可用于区分HIV-1型和HIV-II型。 其缺点是判定结果用肉眼观察，无法保存。 目前这问题已得到解决，为了保存试验结果，试剂盒可配备数码相机。雅培Determine（硒标） 快速试剂试验原理 雅培Determine HIV1/2快速测试试剂是一种用免疫层析法原理,定性测定血样中HIV1/2抗体。 加样本入反应条，当样品通过硒胶体-抗原结合物时，与硒胶体-抗原结合物混合重组结合，此混合物继续迁移通过固相包被的合成肽和重组抗原的结果窗。如果样品中含有HIV1/2抗体，其抗体将会与硒胶体-抗原结合，并在窗口处被固相包被的合成肽和重组抗原所捕获固定，形成一条红线。如果样品中不含HIV1/2抗体，则无红线形成。 为了保证结果有效，在反应条中含有质控条带。金标快速试剂试验原理 CHEK HIV-1+2 （EY） 将HIV抗原吸附在基膜上，加入待检标本后,如果标本中有HIV-1或HIV-2抗体，抗体便被吸附在基膜的抗原上，加入P-A金标记溶液，而其Fc部位则和P-A金标记物结合, 形成如三明治般的粒子，出现肉眼可见的粉红色圆点。 窗口期和残余危险度1、窗口期：HIV感染后至抗体检出前的一段时间称为窗口期。2、残余危险度(residue risk)：在目前条件下，筛查后仍具感染性的机率。影响残余危险度的主要因素包括窗口期、试剂质量、实验室质控以及人群感染率等。各国的残余危险度不一，美国1985年是1/2500,随着检测试剂完善，包括“O”亚型的检出、IgM和p24抗原的检测，到1995年降至1/44-66万；据报道非洲为5/1000,泰国1/775,肯尼亚 1/50。二、艾滋病病毒的抵抗力HIV抵抗力HIV一旦离开宿主在外界环境中生存能力便很快消失，HIV对环境中的物理因素和化学因素抵抗力均较弱，比乙肝病毒（H