第10章基因分析的基本策略 .pptxVIP

从上世纪70年代以来，与DNA、RNA操作相关的各种分子生物学技术不断发展，到目前已经形成了一个庞大而复杂的技术体系。基因操作已成为医学研究的重要手段。简单地说，基因操作就是所有涉及到DNA、RNA操作的技术。 本章主要讨论如何对基因进行定性、定量分析；在随后的2章里分别介绍基因功能研究的技术和基因工程的有关内容。;1、需要进行基因的DNA序列分析:序列测定 2、基因的染色体上定位：原位杂交技术 3、研究基因在基因组中的拷贝数：Southern Blot 4、研究基因表达水平：Northern Blot、逆转录实时PCR技术 5、研究基因表达产物的水平：Western Blot、流式细胞仪（ FACS ）;第一节 利用DNA定性、定量分析可从不同角度对基因和基因组进行研究;1968年华裔生物化学、生物学家吴瑞博士（Dr．Ray Wu） 独创性地设计出一种崭新的引物一延伸测序策略，并于1971年首次成功地测定了λ噬菌体两个COS末端的完整序列； 1977，F.Sanger在该策略的基础上，发展出了快速测定DNA序列的末端中止法； K.Mullis采纳他的方法，完善了PCR扩增DNA的方法； M.Smith发明了碱基定点突变技术。这三位科学家全都获得了诺贝尔奖。;Sanger双脱氧链终止法引入了双脱氧核苷三磷酸（2ˊ,3ˊ-ddNTP）作为链终止剂。 2ˊ,3ˊ-ddNTP脱氧核糖的3ˊ位缺少羟基，它可以与多核苷酸链的3ˊ羟基形成磷酸二酯键，但却不能与下一个核苷酸缩合，导致多核苷酸链的延伸终止。 如果在DNA的合成反应中，加入一种少量的ddNTP，则多核苷酸链的延伸将在随机的位点终止，生成一系列长短不一的核苷酸链。 在4组独立的DNA合成反应中，分别加入4种不同的ddNTP，结果生成的4组核苷酸链将分别终止于各个A，G，C，T的位置上。对这4组核苷酸链进行高分辨变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，就可读出序列。 ;反应：同时加入引物和模板、DNA聚合酶I、一种ddNTP、以及 四种dNTP（有一种带放射性标记）。 变性胶电泳分离反应混合物。 放射自显影术，检测单链DNA片段的放射性。 结果判读，从放射性X光底片上，直接读出DNA的核酸顺序。 ;9、我们的市场行为主要的导向因素，第一个是市场需求的导向，第二个是技术进步的导向，第三大导向是竞争对手的行为导向。七月-21七月-21Sunday, July 18, 2021 10、市场销售中最重要的字就是“问”。13:13:4113:13:4113:137/18/2021 1:13:41 PM 11、现今，每个人都在谈论着创意，坦白讲，我害怕我们会假创意之名犯下一切过失。七月-2113:13:4113:13Jul-2118-Jul-21 12、在购买时，你可以用任何语言；但在销售时，你必须使用购买者的语言。13:13:4113:13:4113:13Sunday, July 18, 2021 13、He who seize the right moment, is the right man.谁把握机遇，谁就心想事成。七月-21七月-2113:13:4113:13:41July 18, 2021 14、市场营销观念：目标市场，顾客需求，协调市场营销，通过满足消费者需求来创造利润。18 七月 20211:13:41 下午13:13:41七月-21 15、我就像一个厨师，喜欢品尝食物。如果不好吃，我就不要它。七月 211:13 下午七月-2113:13July 18, 2021 16、我总是站在顾客的角度看待即将推出的产品或服务，因为我就是顾客。2021/7/18 13:13:4113:13:4118 July 2021 17、利人为利已的根基，市场营销上老是为自己着想，而不顾及到他人，他人也不会顾及你。1:13:41 下午1:13 下午13:13:41七月-21 ;The DNA sequencing method developed by Sanger.;;基本步骤： 1、先将DNA的末端之一标记放射性同位素（32P、35S）； 2、再将DNA样品分别进行多组具碱基特异性、随机的、不完全的化学修饰； 3、采用修饰碱基敏感的特异化学试剂在修饰碱基位置断开DNA链； 4、通过具有可分辨链长短仅一个核苷酸之差的聚丙烯胺凝胶电泳，将DNA断裂片段按分子大小分离开； 5、根据放射自显影胶片上显示的末端标记片段分布情况，直接读出DNA序列。 ;;5`-GATCACTACTG-3`;DNA自动测序仪;;1、揭示基因和基因组一级结构变化在医学研究中具有重要意义。 2、通过DNA序列分析，可以鉴定基因和基因组变异。 3、通过DNA序列分析，可以鉴定分析人工重组的基因。 4、通过