老年非小细胞肺癌一氧化氮合酶原位杂交表达的意义.docxVIP

【摘要】 目的 了解老年非小细胞肺癌患者癌组织中一氧化氮合酶（ NOS）各亚型的 表达及分布。 方法 按照自身配对原则收集老年肺癌癌灶组织及癌灶周围组织各 40 份，分别 进行原位杂交测定 NOS 各亚型的表达及分布。结果 癌组织中 NOS 三种亚型的表达显著高 于癌旁组织（ P＜0 05）；腺癌组织中诱生型一氧化氮合酶（ NOSⅡ）的原位表达显著高 于鳞癌（ P＜0 05）；NOS 三种亚型原位表达与老年肺癌的分化程度无关（ P＞0 05）； 结构型一氧化氮（ cNOS）在老年非小细胞肺癌晚期（Ⅲ～Ⅳ期）原位杂交表达显著下降（ P ＜0 05）;cNOS 在无淋巴结转移者表达高于淋巴结转移者（ P＜0 05）。结论 老年肺癌 患者癌组织中 cNOS（包括 NOSⅠ和 NOSⅢ）的表达与肺癌的病情进展呈负相关，提示 NO/cNOS 途径有抑制老年肺癌发展和转移的作用。 【关键词】 非小细胞肺癌 一氧化氮合酶 原位杂交 一氧化氮（ nitric oxide, NO ）是生物体内一种结构简单的自由基，具有氧化还原特性， 其生物学作用具有双重性，即生物体内适量的 NO 可以抑制和杀伤肿瘤细胞，而过量的 NO 则引起基因突变而致癌 〔1〕。一氧化氮生成必需由一氧化氮合酶 （nitric oxide synthase NOS ） 催化，因此 NOS 活性的高低直接影响 NO 生成的多少。 NOS 成为近年来探索肿瘤发生及预 后的热点， 并相继报道了其与多种肿瘤的相关性， 如间皮瘤、 前列腺癌、 大肠癌 〔2，3〕等。 但对 NOS 在实体瘤中的基因表达、特征、活性、临床表现及恶性程度、分级之间相互关系 的研究还不多〔 4〕，目前尚未见 NOS 与老年肿瘤相关研究。本研究旨在探讨老年非小细胞 肺癌患者组织中 NOS 的表达情况。 1 材料与方法 1 1 一般资料 40 例老年患者肺癌病理手术标本，年龄 60～77 岁(平均 68 岁)，男 17 例，女 19 例。Karnofsky 评分 90～100 分(平均 95 分)。腺癌 25 例，鳞癌 15 例；高中分 化 25 例，低分化 15 例；Ⅰ～Ⅱ期 24 例，Ⅲ～Ⅳ期 16 例；淋巴结转移者 21 例，无淋结转 移者 19 例。 1 2 方法 NOS mRNA 原位杂交试剂盒购自博士德公司。 石蜡包埋组织切片， 常规 脱蜡,二蒸水水化， 3%H2O2 室温处理 20 min ，洗涤 5 min ，在切片上滴加 3%柠檬酸胃蛋白 酶（1 ml 3%柠檬酸＋２滴浓缩型胃蛋白酶） ，37℃消化 15 min，PBS 冲洗以防干燥。每张切 片加 20 μl 预杂交液， 37℃杂交 2～4 h，吸取多余液体，再加 20 ml 杂交液，用封口膜封 片，37℃杂交 16～20 h。杂交后用 37℃ 2× SSC洗涤２次，每次５ min，再用 0 5× SSC 洗涤 15 min ，0 2× SSC 洗涤 15 min ，滴加封闭液，置 37℃ 30 min 。以地高辛标记的生 物素 DAB 显色。迈新苏木精复染，常规脱水，透明，封片。 1 3 结果测定 采用美国 HPIAS 1000 图像分析仪，在低倍镜下（× 10）选 3 个 原位杂交区域， 在 200 倍视野下测量其灰度值， 所测得的灰度值与实际原位杂交染色强度成 反比。 1 4 统计学处理 所得数据用 x± s 表示。 两样本均数的比较采用 t 检验或 t′检验。 2 结果 2 1 癌组织及癌旁组织 NOS 三种亚型原位表达 肺癌组织中有三种 NOS 表达与癌 旁组织中 NOS 同工酶的表达具有显著差异（ P＜0 05）。阳性染色位于癌细胞或炎性细胞 浆，呈弥漫着色或颗粒着色 (表 1)。 2 2 不同组织类型肺癌 NOS 三种亚型原位表达 肺癌组织中有 NOS 表达与 NOSⅢ 在不同病理组织中无显著差异（ P＞0 05），NOSⅡ在腺癌中的表达高于鳞癌，差异具有 显著性（ P＜0 05）(表 2)。 2 3 组织分化程度肺癌 NOS 三种亚型表达 所测肺癌组织中有 NOS 表达三种亚型 原位表达与老年肺癌的分化程度无关（ P＞0 05）(表 3)。 2 4 不同临床分期肺癌 NOS 三种亚型表达 所测肺癌组织中有 NOSI、NOSⅢ表达 在老年非小细胞肺癌晚期 （Ⅲ～Ⅳ期） 原位杂交表达显著下降 （P＜0 05），NOSⅡ在Ⅰ～ Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期老年老年非小细胞肺癌组织中表达无明显差异（ P＞0 05）(表 4)。 2 5 淋巴结转移对 NOS 三种亚型表达 所测肺癌组织中有 NOSI 、NOSⅢ表达在无 淋巴结转移者高于淋巴结转移者（ P＜0 05），NOSⅡ表达与有无淋巴结转移无相关性（ P ＞0 05）(表 5)。 表 1 癌组织及