蛋白质的修饰和表达.pptVIP

1．利用基因融合技术表达外源基因的缘由 外源蛋白通常易被宿主的蛋白水解酶降解 通过与特异蛋白质或特异的结构域形成融合蛋白，利于快速回收、纯化 融合蛋白可以体外切割去除融合部分，可以获得天然蛋白 通过与特定的蛋白质形成融合蛋白，可以避免外源蛋白在细胞内形成包涵体 基因融合是对基因进行改造的手段，广泛用于蛋白质结构功能的研究 第三十页，共63页。 2．1 基因融合的策略 将重组基因直接剪接于适当的信号肽之后 将外源基因本身按阅读框架自我融合。对一些小肽的稳定表达、表达产物的活性非常重要 目标蛋白在与其融合的蛋白伙伴序列的C端或N端融合 第三十一页，共63页。 分泌－亲和融合。即：信号肽－融合蛋白－目标基因 双亲和融合法。即将目标基因与两个不同配基有特异亲和的异源或载体蛋白融合 分泌－插入融合法。此法是将目标基因插入到信号肽序列和一插入序列之间，此插入序列是一种插入到细胞膜或细胞壁的蛋白编码 设计目的：用以将受体或抗原定位于细胞的外表面或装配成融合蛋白进入类病毒颗粒，利于开发疫苗，或产生具有免疫原的复合物 2．1 基因融合的策略 第三十二页，共63页。 2.2 产生蛋白质分子嵌合体的策略 通过限制性内切酶位点连接 条件：两个蛋白质之间有相同的限制性内切酶位点 通过缺失突变的方法连接 条件：两个蛋白质之间有相同的额外的碱基序列 通过