蛋白质的研究方法.pptVIP

流动相： 洗脱剂--柠檬酸盐 作用：柠檬酸离子因与Ca2+有更强的相互作用， 它能大大降低蛋白质和凝胶的吸附能力。 NaCl，KCI甚至浓度高达3M时，也不影响Pr负电荷的吸附，相反这些盐可以大大降低Pr正电荷的吸附。因此在高浓度的这些盐溶液中应用羟基磷灰石进行层析时，可以专门吸附酸性蛋白质及中性蛋白质而排除碱性蛋白质。 第六十二页，共124页。 亲和层析法 1.原理：利用生物高分子具有能和某些相对应的专一 分子可逆结合的特性。 如，酶的活性部位能和底物\抑制剂\辅助因子专 一性地结合,改变条件又能使这种结合解除. [酶的变构中心与变构因子（或称效应物）之 间、抗体与抗原之间、激素与受体之间，结 合蛋白与结合物之间]。 这些被作用的对象物质称之为配基（ligand) 。 ? 第六十三页，共124页。 固定相--配基固定在固相载体上 第六十四页，共124页。 第六十五页，共124页。 2.优点：具有高度的吸附专一性 层析过程简便、快速 3.载体的选择： (1)必须具有高度亲水性，使Pr分子容易与它接近. (2)非专一性吸附要十分小。 (3)必须具有大量可供活化而能与配基结合的基团。 ? 常用载体：纤维素、