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蛋白质杂交技术 第一页，共28页。 检测DNA可用Southern印迹法 检测RNA可用Northern印迹法 检测蛋白质同样有蛋白质印迹法（Western印迹法） 蛋白质印迹是将蛋白质转移到固相支持物上，然后利用抗体与附着于固相支持物上的靶蛋白发生特异性的抗原抗体结合反应 第二页，共28页。 待测样品经过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS） 被转移到固相支持物上，固相支持物以非共价键的形式吸附蛋白质 以固相支持物上的蛋白质为抗原，与对应的抗体发生特异性的抗原抗体结合反应 与酶或同位素标记的第二抗体发生反应 经过底物显色或放射自显影，以检测电泳分离的靶蛋白。 一、原理 第三页，共28页。 Western印迹有SDS的高分辨力 固相免疫测定的高特异性和敏感性，可测出1ng～5ng中等大小的蛋白质。 由于蛋白质的电泳分离几乎总是在变性的条件下进行，因此，不存在溶解、聚集以及靶蛋白与外来蛋白的共沉淀等问题。 还具有简便、标本可长期保存、结果便于比较等优点。 第四页，共28页。 （一）蛋白提取试剂 1．细胞裂解液　 20mmol/L Tris(pH 7.5) 150mmol/L NaCl 1% Triton X-100 焦磷酸钠，β-磷酸甘油，EDTA，正钒酸钠(Na3VO4)亮抑肽素等多种蛋白酶抑制剂 二、试剂 第五页，共28页。 2×蛋白上样缓冲液 10