蛋白质结合相互作用及研究方法.pptVIP

FRET常见的供体-受体荧光分子对： 荧光蛋白类： 染料类： CFP-YFP BFP-GFP BFP-YFP CFP-DsRFP GFP-DsRFP CFP-YFP-mCherry 第六十三页，共99页。 均相检测（无分离和洗涤步骤） 实时连续地观察活细胞的动态变化 FRET技术的优势和缺点 Fluorescence Intensity Time Ligand Cy3 Cy5 荧光强度随时间衰减，有时间限制； 采集信号有噪音 缺点： 第六十四页，共99页。 假阴性问题 转染效率，尤其是目标蛋白是膜蛋白时 配对的供体和受体之间距离和方向不合适，即便形成复合物，FRET也不会产生； 仪器的敏感度、分辨率、及影像采集和分析能力 假阳性的问题 没有相互作用的供体和受体之间相隔很近的话，也可以发生FRET； 所以，应结合多种蛋白相互作用的研究方法（如免疫共沉淀） FRET荧光能量转移应注意问题： 第六十五页，共99页。 FRET应用范围 酵母双杂交系统、噬菌体展示系统所筛选克隆的复证 蛋白质—核酸相互作用 酶活性分析 离子通道研究 蛋白质的结构研究 第六十六页，共99页。 Technique Extension- Bimolecular fluorescence complementation (BiFC