基因诊断专题教案.pptVIP

已通过国家药品食品监督管理局（ SFDA ）审批的基因诊断试剂 学习文档 序号 试剂盒名称 1 乙型肝炎病毒（HBV）核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒 2 乙肝病毒核酸荧光定量检测及YMDD变异检测试剂盒 ? 丙肝病毒（HCV）核酸扩增（PCR）—荧光检测试剂盒 结核分支杆菌（TB）核酸扩增（PCR）—荧光检测试剂盒 沙眼衣原体（CT）核酸扩增（PCR）—荧光检测试剂盒 6 沙眼衣原体和淋球菌（CTNG）核酸扩增（PCR）荧光检测试 剂盒 7 人乳头瘤病毒（HIV）核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒 ? 8 人类免疫缺陷病毒（HIV—1）核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂盒 9 新型冠状病毒（SARS）核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒 10 神经管畸形基因检测（PCR—RFLP）试剂盒 ? 11 地中海贫血基因检测试剂盒（基因芯片法) 学习文档 病原体基因诊断的发展趋势 1 、提高自动化程度。从标本预处理、核酸提取到基因扩增和产物检测都有望实现自动化，可将人为误差降到最小，提高检测的精确度，提高工作效率。 2 、测定方法和工作程序的标准化。通过标准化改善实验室测定准确度，从而提高不同实验室间结果的可比性。 3 、在严密设计的临床应用研究基础上，确定每一个基因诊断项目适用的范围，避免滥用造成的困扰和不必要的费用。 4 、开发更加快捷廉价的检测方法 学习文档 三 、基因诊断在法医学中的应用 法医学中对生物样本检测的主要目的是达到个人识别和亲子鉴定 80年代以来，以核酸分子杂交和PCR技术为核心的基因诊断学的迅速发展，有逐渐取代传统法医物证鉴别法的趋势 法医学基因诊断的分子基础是基于人类基因组结构中存在一些可作为个体特征标示的序列,即可变串连重复序列（小卫星DNA ）的多态性 学习文档 三.基因诊断在法医学中的应用 DNA指纹技术： 遗传基础是DNA的多态性 个体特征标志的序列 建立于1985年 学习文档 Human genome: 3.3 billion bp with 40000 genes 1.1%: exons; (Coding region) )) 24% introns, 75% intergenic Noncoding 学习文档 Genome: Coding region (编码区)： 5% in human genome (1.5%). 2. Noncoding (非编码) DNA: introns (内含子), tandemly repeated (串连重复) sequences (e.g. satellite DNA) or interspersed repeats 分散重复 (e.g. Alu element). 学习文档 可变串联重复序列（variable number of tantem repeat VNTR) 5’ – ATAAACTATAAACTATAAACT – 3’ 3’ – TATTTGATATTTGATATTTGA – 5’ n （核心序列） Satellites comprise more than 40% of the genome 小卫星DNA核心序列长10-70bp，主要分布于基因组的非编码区。不同个体重复次数相差悬殊，因而长度变化较大，呈现多态性。可以用来鉴别个体 (小卫星DNA) 学习文档 DNA指纹技术： 遗传基础是DNA的多态性 个体特征标志的序列 建立于1985年 学习文档 方法: 指纹图谱法: 用HinfI切割染色体DNA.由于该酶在小卫星DNA的重复序列上无切点,因此电泳后在用标记的小卫星DNA做探针杂交时,不同个体出现不同的杂交带型,称为指纹图谱.至今世界上还未发现有两个人的杂交带型完全相同. 学习文档 不同的个体或群体有不同的DNA指纹图:英国遗传学家杰弗里斯对白种人研究表明，两个随机个体具有完全相同的DNA指纹图的概率，为三千亿分之一(即3×10-11)。两个同胞个体具有相同图谱的概率也仅仅为二百万分之一(即2×10-6)。但同卵双胞胎的DNA指纹图完全相同。 学习文档 DNA指纹术的工作原理及步骤 提取DNA (样品:毛发、血痕、精斑、人体组织或白骨等) 用限制性内切酶HinfI切割，将DNA切割成许多长度不同的小片段。 对酶解完全后的DNA片段进行电泳，分离各酶切片段。 先用碱性溶液使凝胶板中双链DNA片段变性为单链片段，然后将凝胶板夹在尼龙膜中，使这些单链DNA片段转印到尼龙膜上。 让放射性核心序列探针与尼龙膜上的单链DNA片段进行分子杂