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间接免疫荧光检测 第一页，共11页。 原 理 间接免疫荧光法是用荧光素标记Ab2以检测Ag或Ab的一种实验技术。其原理是Ag首先与Ab1结合，然后Ab1再与荧光素标记的Ab2结合，形成一个Ag- Ab1-荧光素标记Ab2的三分子复合物，在荧光显微镜下呈现荧光。 第二页，共11页。 外周血单个核细胞分离 ------ 葡蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法 [原理] 外周血单个核细胞（PBMC）包括淋巴细胞、单核细胞，其体积、形状和比重与其他细胞不同。红细胞和多核细胞比重较大，为1.092左右，而淋巴细胞和单核细胞比重为1.075左右。利用比重为1.077左右的分层液作密度梯度离心，使一定比重的细胞按密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。 第三页，共11页。 [材料] 1、淋巴细胞分层液（葡蔗糖-泛影葡胺，比重为1.077±0.001g/L） 2、 2％台盼蓝染液 3、 Hank’s液或者RPMI-1640培养基 4、试管、吸管、水平离心机等 第四页，共11页。 [方法] 1、无菌采集静脉血2ml注入盛有2ml Hank’s液（含100u/ml肝素）的试管中，混匀。 2、吸取淋巴细胞分层液2ml加入离心管中，再将稀释抗凝血液小心沿管壁加至分层液上，应注意保持两者界面清晰。（关键）