微生物实验室无菌操作技术规范.pdf

1.目的 规范无菌操作流程,减少及避免发生染菌现象出现。 2.使用范围 无菌室及洁净区的操作。 3.无菌操作技术原则 3.1环境要清洁,在每次无菌操作结束后都需要对环境进行清理、清洗;且避 免操作前进行清扫。 3.2做好个人卫生,进入无菌室前需修剪指甲、洗手,穿好无菌服,帽子需遮住 所有头发, 口罩遮住口鼻。 3.3在无菌操作时,不可讲话,打喷嚏,对怀疑染菌的无菌物品,不可使用。 4.内容 4.1.1准备:工作人员着装整洁,洗手、戴口罩、修剪指甲;备齐用物(如:接种 针、接种环、酒精灯、斜面、平皿、摇瓶、75%酒精棉、无菌水等);核对无菌用品, 接种菌种的种类、型号。 4.1.2 所有实验使用的物品都需要进行消毒、灭杀;进入洁净区前需要经传递 窗进行紫外表面消毒30min 以上; 4.1.3 开始实验前需要打开超净台的紫外灯,消毒半个小时以上;超净台避免 放入过多的物品(一般只放入当次的实验所有的物品),所使用的试剂和耗材都需事 先进行灭菌(灭菌日期超过4天的需重新消毒)。 4.1.4 进入洁净区前关闭紫外灯,并打开风机,等待半个小时以上,使臭氧尽量 排放干净。 4.1.5 除去手腕等部位的饰品,穿好无菌服,戴好头套、口罩,做到“三不漏”: 不暴漏头发,不暴漏口鼻,不暴漏躯干皮肤和衣物。 4.1.6双手要进行清洗、消毒。 4.1.7要经风淋室风淋30秒后再进入洁净室。 4.1.8在局部百级区域操作要戴一次性无菌手套。 4.1.9 实验操作过程中应尽量减少进入洁净区的人员(不超过4人/间)并尽量 减少人员走动。 4.1.10 所有要放入超净工作台的物品都需进过消毒液喷洒擦拭消毒。 4.1.11无菌物品若取离超净台则视为已污染,不得放回再用;无菌液体在取离 超净台前必须密封其开口;密封的无菌液体容器在放入超净台后,对其开口前须对开 口在酒精灯火焰上烧烤。 4.1.12在拆开任何一次性无菌使用耗材的包装时都要在超净台内完成,并须 同时保证与细菌直接接触的使用端/面不得与超净台内的任何物品发生触碰。 4.1.13工作台面上的用品要放置有序、布局合理,一般说酒精灯(当工作不需 要时也可不用)在中间,右手使用的物品在右侧,左手使用的物品在左侧。工作时忌 忙乱而要有序。 4.1.14 开始操作前先用医用酒精对双手进行消毒。 4.1.15点燃洁净工作台内的酒精灯,在打开/关闭试剂瓶口、试管口时应将瓶 口或者试管口过火;接种针、接种环在使用前或在与台面发生碰触后应经过火焰的 灼烧;接种针/接种环过火操作方法为:使其头部到身部反正面在火焰上各烤燎通红; 烧过的器械要冷却后才能使用,以免对细菌造成损伤。 4.1.16操作前试管(或摇瓶)口需要在火焰上方反转镣铐两周。 4.1.17操作时左手拿试管(或摇瓶),右手拇指、食指、中指操作接种针(接种 环),右手小 指和无名指夹住瓶塞,取下瓶塞,瓶塞再反转镣铐两周后开始操作。 4.1.18在超净台内,尽量避免瓶口长时间敞开直立。 4.1.19盖封瓶口时,应将瓶口和瓶盖内面各自在火焰上燎烤两周再盖上瓶 盖。 4.1.20 实验用胶塞、橡皮乳头等橡胶和塑料用品在过火焰时也不能时间过长, 以免烧焦产生有毒气体,危害培养的细胞。 4.2 无菌液体标准转移程序: 4.2.1无菌液体的转移须在超净台进行,转移过程要尽量保持密闭,必须用移 液管或移液器来完成操作; 4.2.2 移液管上方口应塞入棉絮(脱脂棉),用牛皮纸包好进行消毒灭杀; 4.2.3无菌液体瓶再封口时,须将瓶口和瓶盖分别燎烤2周后再封盖;封盖后 须贴上相应的标签; 4.2.4在使用移液管转移液体时,应保证移液管尖端距移液器边缘1cm以上; 在使用移液管时,每次液体吸入量不应超过移液管的警示标记,更不能触及移液管上 方的防尘棉絮;在使用移液管移出废液时,移液管尖端应距废液缸5cm 以上;在将细 胞悬液转移至培养瓶中时,移液管尖端应距培养瓶0.5cm 以上; 4.2.5放置吸管时管口应向下倾斜,以防液体倒流入橡皮乳头内而引起污染或 者损坏电动移液枪; 4.2.6 向离心管、细胞冻存管、培养瓶、培养皿内添加液态物质时,所加入的 量不应超过管上所标示的最大量;