食管鳞癌tgf受体基因启动子区甲基化状态研究.pptxVIP

食管鳞癌tgf受体基因启动子区甲基化状态研究会计学亚硝胺类化合物吸烟、饮酒营养缺乏霉菌感染环境因素与遗传因素共同作用并非所有暴露个体均患病 遗传因素和表观遗传因素食管癌冀医四院传统的多途径多步骤的基因突变引起肿瘤的观点日益受到挑战，目前众多的研究者认为，肿瘤最早的发生可能源于干细胞阶段的表观遗传学改变，表观遗传学的改变可能发生的更早些。DNA甲基化 表观遗传学组蛋白修饰染色体重塑RNA干扰冀医四院DNA 甲基化是在DNA甲基转移酶的作用下,以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体,将甲基基团转移到胞嘧啶第5位碳原子上,从而转变成5-甲基胞嘧啶（5-mC）。基因启动子区域的CpG 岛正常状态下不发生甲基化，一旦由于某种原因而发生甲基化就会导致基因转录沉寂，使重要基因如抑癌基因、修复基因等丧失功能，有可能导致肿瘤发生。冀医四院冀医四院 头颈部鳞癌、胃癌及胰腺癌细胞株中TβRⅠ基因甲基化与其表达降低有关。 小细胞肺癌中TβRⅠ和Ⅱ表达缺失与基因甲基化无关。 对非小细胞肺癌、前列腺癌的研究显示，TβRⅡ基因的表达缺失与其甲基化之间存在高度相关性。 冀医四院 本研究应用甲基化特异性PCR反应(MSP)和RT-PCR技术检测食管鳞状细胞癌组织中TGF-β受体Ⅰ、Ⅱ基因(TβRⅠ、Ⅱ)启动子区甲基化状态和mRNA表达水平，并结合临床资料探讨其与临床病理资料的关系，为确定TβRⅠ、Ⅱ甲基化与ESCC发生发展之间的关系提供理论依据。冀医四院研究目的年龄：范围在26-74岁，中位年龄57.4岁性别：男性51例，女性14例65例贲门癌组织、59例相应癌旁组织TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期37例，Ⅲ、Ⅳ期28例 病理分级：高、中分化组55例，低分化组10例 冀医四院TβRⅠ和TβRⅡ基因MSP引物 基因CpG 状态 引物序列（5’—3’）退火温度(℃)产物大小(bp) TβRⅠ UCAACCCTCCAAAACTAACAACTAAACAA 60 147TGTTGGTTTTTGGTTATGTTTTATGTTTTTT MACCCTCCGAAACTAACGACTAAACGA 52 142CGGTTTTTGGTTACGTTTTACGTTTTT TβRⅡ UTTGAAAGTTGGTTAAAGTTTTTGGA 55 123AAACAAAACCTCTCTCCACCCA MGAAAGTCGGTTAAAGTTTTCGGAACAAAACCTCTCTCCGCCCG 53119冀医四院 case 1 case 2 case 3 case 1 case 2 case 3 TβRⅠ TβRⅡ Methylation analysis of TβRⅠand TβRⅡ in tumor tissue (T) and corresponding normal tissues (N). u: indicates the presence of unmethylated genes; m: indicates the presence of methylated genes. Cases 1: tumor-specific methylation; Case 2: the tumor is fully methylated, whereas the corresponding normal tissue has a very faint band demonstrating methylation; Case 3: both of tumor and corresponding normal tissue unmethylated.冀医四院Unmethylated原始序列：GGGGAGCGTGGGGCGTGGCCAGAAACCGG 非甲基化序列：AAAAAACATAAAACATAACCAAAAACCAA甲基化序列： AAAAAACGTAAAACGTAACCAAAAACCGAMethylatedTβRⅠUnmethylated原始序列：TCGGGCGGAGAGAGGTCCTGC非甲基化序列：TTGGGTGGAGAGAGGTTTTGT甲基化序列： TCGGGCGGAGAGAGGTTTTGTMethylatedTβRⅡ冀医四院Frequency of TβRⅠ,Ⅱ gene methylation in ESCC and adjacent non-cancerous tissuesGeneMethylation ratio χ2 Ptumor tissueadjacent non-cancerous tissueTβRⅠ52.3%（34/65）40.7%(24/59) 1.6800.195TβRⅡ70.8%(46/65)