本科生化第04章核酸之.pptxVIP

第四章　核酸§4.3　DNA的分子结构5’ end3’ end一、DNA一级结构1、概念：构成DNA的脱氧核苷酸按照一定的排列顺序，通过3’,5’-磷酸二酯键相连形成的线形结构。2、阅读和书写均由5＇→ 3＇（1）线条式书写（2）字母式书写 ?① 5’ -pApCpGpTpAOH-3＇ ② 5’ -ACGTA-3＇3、一级结构的测定(测序)Sanger提出用双脱氧核苷酸测定DNA一级结构的双脱氧末端终止法使他于1980年第二次获得了Nobel化学奖。双脱氧末端终止法测序原理如下图：二、DNA的二级结构（一）DNA的碱基组成（Chargaff法则）上世纪20年代，Levene研究了核酸的化学结构并提出四核苷酸假说；40年代末，Avery, Hershey和Chase的实验严密地证实了DNA就是遗传物质；50年代初，Chargaff应用紫外分光光度法结合纸层析等简单技术，对多种生物DNA作碱基定量分析，发现DNA碱基组成有如下规律： ZDNA来源腺嘌呤（A）胸腺嘧啶（T）鸟嘌呤（G）胞嘧啶（C）（A+T）/（G+C）大肠杆菌25.424.824.125.71.01小麦27.327.122.822.71.21鼠28.628.421.421.51.33猪：肝29.429.720.520.51.43猪：胸腺30.028.920.420.7猪：脾29.629.220.420.8酵母31.332.918.717.51.079不同生物来源的DNA四种碱基比例关系DNA碱基组成规律 —— Chargaff规则同一生物的不同组织的DNA碱基组成相同；同一种生物DNA碱基组成不随生物体的年龄、营养状态或者环境变化而改变； 几乎所有的DNA，无论种属来源如何，其腺嘌呤摩尔含量与胸腺嘧啶摩尔含量相同[A] = [T]，鸟嘌呤摩尔含量与胞嘧啶摩尔含量相同[G] = [C]，总的嘌呤摩尔含量与总的嘧啶摩尔含量相同[A]＋[G]=[C]＋[T]。不同生物来源的DNA碱基组成不同，表现在A＋T/G＋C比值的不同。这些结果后来为DNA的双螺旋结构模型提供了一个有力的佐证。（二）?DNA的二级结构——双螺旋结构Watson, Crick （1953年）在Chargaff法则及Wilkins, Franklin的X线衍射工作基础上提出DNA的双螺旋（double helix）结构模型James Watson，Francis Crick 以及 Maurice Wilkins三人因此发现共同获得了1962年Nobel医学和生理学奖1、DNA双螺旋的基本特征两条反向平行的多核苷酸链围绕同一中心轴相互缠绕进行右手螺旋。碱基位于双螺旋内侧，磷酸和戊糖相间排列组成骨架，位于外侧。螺旋平均 d＝2 nm，碱基堆积距离0.34 nm，相邻核苷酸之间夹角为36?，每旋转一周包含10碱基对(base pair，bp)，每周高度3.4 nm。两条链的碱基之间互补配对方式为：A→T, C→G。双螺旋表面有大沟（major groove）和小沟（minor groove）： 大沟：宽1.2 nm，深0.85 nm 小沟：宽0.6 nm，深0.75 nm碱基配对的结构0.34 nm3.4 nm2 nm DNA结构双螺旋结构的提出，被认为是本世纪生命科学史最重要的贡献之一，同时也是自然科学史上的重大贡献。它直接解释了生物遗传信息的传递与表达的规律，使生命科学从此进入一个崭新的时代即分子生物学时代。2、DNA双螺旋结构的稳定因素碱基堆积力链间氢键疏水作用其它次级键：离子键，范德华力(三) DNA二级结构的多态性 所谓DNA二级结构的多态性，是指DNA不仅具有多种形式的双螺旋结构，而且还能形成三链、四链结构，说明DNA的结构是动态的，而不是静态的。 核酸的构型多样性是由于核酸主干链上各键和碱基的旋转造成的，而多链的DNA是特定的碱基序列导致的结果。1. DNA双螺旋的不同构型B-DNA螺旋：标准的?Watson, Crick双螺旋，细胞常状态下DNA存在的构型。(2) A-DNA螺旋：DNA在75%相对湿度的钠盐中的构型。(3) C-DNA螺旋：DNA在66%相对湿度的锂盐中的构型。(4) Z-DNA螺旋：左手的DNA螺旋，这种螺旋可能在基因表达或遗传重组中起作用。螺旋方向碱基升高 (bp)碱基数/圈螺距螺旋直径 (nm)A-DNA右手0.23112.532.55B-DNA右手0.3410 (10.5)*3.4(3.57)*2.0Z-DNA左手0.38124.561.8⒉ 与DNA碱基顺序相关的特殊二级结构(1) 回文序列 指DNA某一片段旋转180° 后,顺序不变的序列，回文序列中的单链可形成发夹结构。双链可形成十字架结构。这种发夹结构或十字架结构在大肠杆菌细胞DNA中已有发现。核酸分子中