第三章_微载体培养技术.pptVIP

一、何谓微载体？ 指直径60-250μm，能适用于贴壁细胞生长的微珠。 一般是由天然葡聚糖或者各种合成的聚合物组成。;最初采用在培养液中加入一定数量的小滚瓶，增加细胞生长的贴壁面积。;1967年被用于动物细胞大规模培养。 兼具悬浮培养和贴壁培养的优点，放大容易。 现广泛用于培养各类细胞，生产疫苗、蛋白质产品。;二、微载体的商品类型;显微镜下的高密度微载体;优良的微载体应具有的特性;三、微载体培养原理与操作 ;●微载体的大小：增大单位体积内表面积（S/F）对细胞的生长非常有利。使微载体直径尽可能小，最好控制在100-200μm之间。 ;细胞能否黏附，主要取决于细胞与微载体的接触概率和相融性。 ;Vero细胞在Cytodex-3微载体表面粘附铺展的形貌变化;通常做法：贴壁期采用低搅拌转速，时搅时停；数小时后，待细胞附着于微载体表面时，维持设定的低转速，进入培养阶段。微载体培养的搅拌非常慢，最大速度75r/min。 ;搅拌速率越大，制得的微球越小，聚合物浓度越大，制得的微球较大; 3、细胞与微载体的相融性： 与微载体表面理化性质有关。一般细胞在进入生理pH值时，表面带负电荷。若微载体带正电荷，则利用静电引力可加快细胞贴壁速度。若微载体带负电荷，因静电斥力使细胞难于黏附贴壁，但培养液中溶有或微载体表面吸附着二价阳离子作为媒介时，则带负电荷的细胞也能贴附。 ;(a)MCC细胞，未经处