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遗传学实验果蝇杂交设计书 一、单因子试验 1、实验原理 分离定律（ law of segregation ）也称孟德尔分离定律。一对基因在杂合状态下不互相影响，各自保持相对的独立性，而在形成配子的时候，就会互相分开，并按照原样分配到不同 的配子中去。 在一般情况下，配子的理论分离比是 1:1，子二代（ F2）的基因型分离比是 1:2:1，若显 性完全， F2 的表型分离比是 3:1。杂种后代分离出来的隐性基因纯合体与原来隐性亲本在表型上是一样的，隐性基因并不因为和显性基因在一起而改变它的性质。 单因子杂交是指一对等位基因间的杂交。 野生型果蝇是长翅（ +/+ ），其长翅超出腹部末端约 1/3. 残翅果蝇的双翅已经退化，只留下少量残迹（ vg/vg ），无飞翔能力。 Vg 的基因座位于第二染色体 67.0, 。对长翅（ +）完全隐性。 用野生型长翅果蝇与残翅果蝇杂交， 子一代（ F1） 全是长翅。 子一代系内交配， 子二代产生性状分离，长翅：残翅为 3:1,。 基因型为 +/vg（长翅）雌雄均可产生两种配子 +和 vg，并且各占 1/2, 。简单列表可知 F2 的性状比为 3:1。 表 1 果蝇杂交实验的配子及双翅形状的遗传 F1♀配子 F1♂配子 1/2 + 1/2 vg 1/2 + 1/2 vg 1/4 +/+ 长 翅 1/4 +/vg 长翅 1/4 +/vg 长 翅 1/4 vg/vg 残翅 2、实验步骤 确定杂交亲本，挑选处女蝇。 选用 2#与 18#为亲本进行杂交实验。 选用野生型长翅和突变型残翅果蝇为杂交亲本。 雌蝇一定要选处女蝇。 处女蝇的挑选方法：亲本饲养 2 周之后，提前 10—12 小时把培养瓶内所有活的成虫倒干净，然后在倒掉成 虫的 12 小时内吧新羽化的成虫倒出来，装进消毒过的培养瓶或者平底试管进行适度麻醉， 麻醉后放在消毒过的白瓷板或者硬纸板上把雌雄蝇分别挑出， 雌蝇即为处女蝇。 根据实验所需处女蝇数量的多少，可连续收集，但不要超过 3 天。 配好杂交组合，进行正、反杂交。 正交组合： 野生型长翅 （♀） ×突变型残翅 （♂）。用消毒过的毛笔把 3—4 只长翅处女蝇扫入培养瓶中， 然后把培养瓶水平放置， 一面麻醉状态下的果蝇沾到培养基或水珠而被闷死， 随机用同样方法扫入 3—4 只残翅雄蝇，塞紧棉塞，贴好标签，保持水平直至果蝇苏醒后放 入 25℃恒温培养箱中培养。 反交组合：将亲本性别交换。 培养 7 天之后把亲本果蝇成虫全部倒出来处死。 再过 7 天 F1 成蝇出现，把 F1 成蝇转移到经过消毒的空瓶子里进行适度麻醉，观察 F1 翅形的变化，并把结果记录。把 5~6 对适度麻醉的 F1 转入另一培养瓶，标明信息。 表 2 正 、 反交 F1 果蝇翅形观察结果记录表 观察结果 长翅♀×残翅♂ 残翅♀×长翅♂ 统计日期 长翅数 残翅数 长翅数 残翅数 合计 过 7 天， F1 成虫倒出处死，培养基继续培养。 （ 6）过 7 天， F2 成虫出现， 开始观察，可以连续观察 7 天左右，往后可能有 F3 成虫出现，所以观察时间不要超过 8 天。记录数据，观察过的成虫集中处死。 表 3 正、反交 F2 果 蝇翅形观察结果记录表 观察结果统计日期 长翅♀×残翅♂ 残翅♀×长翅♂ 长翅数 残翅数 长翅数 残翅数 合计 （7）处理数据，并进行卡方检验，来确认是否符合理论猜测比值。 2表 4 实验结果χ 测验表 2 观察结果实验观察数 （ O） 预期数 3:1（ C） 偏差（ O-C ） （ O-C） 2/C 长翅（ +）正交、反交合 并 残翅（ vg）正交、反交合 并 合计 3、实验预期结果 F1 全部为长翅果蝇，而且正反交结果一样。 F2 出现翅形的性状分离， 并且数量比大约符合长翅： 断翅为 3:1，且正反交结果类似。通过卡方检验证明实际分离比与理论分离比一致。 二、两对基因自由组合实验 1、实验原理 由非同源染色体上的两对等位基因所决定的两对相对性状， 在杂种第二代是自由组合的。根据孟德尔第二定律，一对基因的分离与另一对（或者另几对）基因的分离是独立的。 一对基因所决定的性状在杂种第二代是 3:1，两对不连锁的基因所决定的形状，在杂种第二代就 呈 9:3:3:1，黑檀体果蝇（ e）的体色乌黑， e 的基因座位于 3 号染色体 70.7；与 e 相对应的野生型性状是体色灰黄。残翅果蝇（ vg）的双翅几乎没有，只能看到少量残迹， vg 的基因座位于 2 号染色体 67.0；与 vg 相对应的野生型是长翅。由于 e 和 vg 位于不同源的染色体上， 所以两对基因杂种在形成生殖细胞的时候，会产生 4 种不同类型的配子，其理论比例为