淀粉酶检测方法.pdf

工业用 α-淀粉酶制剂 1、 定义 ：1g 固体酶粉（或 1ml 液体酶），于 60℃、PH=6.0 条件， 1h 液化 1g 可溶性淀粉， 即为 1 个酶活力单位，以 u/g （u/ml ）表示。 2、 试剂和溶液 2.1 原碘液 称取碘 11g、碘化钾 22g，用少量水完全溶解，然后定容至 500ml，则贮于棕 色瓶中。 2.2 稀碘液 吸取原碘液 2.00ml ，加碘化钾 20g，用水溶解并定容至 500ml，贮于棕色瓶中。 2.3 20g/L 可溶性淀粉溶液 称取可溶性淀粉（以绝干计） 2.000g ，精确至 0.001g ，用水 调成浆状物，在搅动下缓缓倾入 70ml 蒸馏水，然后以 30ml 水分几次冲洗装淀粉的烧 杯，洗液并入其中，加热至完全透明，冷却，定容至 100ml。此溶液需要当天配制。 2.4 磷酸缓冲液 (PH=6.0) 称取磷酸氢二钠 45.23g 、柠檬酸 8.07g ，用水溶解并定容至 1000ml。配好后用 PH计校正。 3. 仪器和设备 3.1 分光光度计 应符合 GB 9721 的有关规定。 3.2 恒温水浴锅 （60 ±0.2 ）℃. 3.3 秒表。 3.4 试管 25mm×2000mm。 4. 分析步骤 4.1 待测酶液的制备：称取酶粉 1－2g，精确至 0.0002g （或液体酶 1.00ml ），先用少量的 磷酸缓冲液（ 2.4 ）溶解，用玻璃棒搅拌，将上清液移入容量瓶，沉渣部分继续溶解， 最后全部移入容量瓶后定容。 （将估计酶活除以 4 ，即酶活力应在 3.7-5.6 之间），摇 匀。通过 4 层纱布过滤，滤液供测试使用。 4.2 测试 4.2.1 吸取可溶性淀粉溶液（ 2.3 ）20.0ml 于试管中，加入缓冲液（ 2.4 ）5.00ml ，摇匀后， 于（60 ±0.2 ）℃预热 5min。 4.2.2 加入稀释好的待测酶液（ 4.1 ）1.00ml ，摇匀，准确反应 5min 。 4.2.3 立即吸取反应液 （4.2.2 ）1.00ml 于稀碘液 5.00ml 中，摇匀， 并以稀碘液作为空白， 于 660nm波长处，迅速测定其吸光度（ A）。根据其吸光度查附表中酶液的浓度（ c ）。 5. 计算： 1 X=c×n 式中 X ——样品的酶活力（ u/g ；u/ml ） c——测试酶液的浓度（ u/ml ） n——样品的稀释倍数 所得结果取整数。 2 附表：吸光度于测试淀粉酶酶浓度对照表 酶浓度（ c ） 酶浓度（ c ） 酶浓度（ c ） 吸光度（ A） 吸光度（ A） 吸光度（ A） （u/ml ） （u/ml ） （u/ml ） 0.100 4.694 0.127 4.559 0.154 4.423 0.101 4.689 0.128 4.554 0.155 4.418 0.102 4