分子荧光光谱法实验报告总结计划范文.docVIP

分子荧光光谱法实验报告总结计划范文 分子荧光光谱法实验报告总结计划范文 PAGE PAGE4第PAGE页码4页/总合NUMPAGES总页数4页 分子荧光光谱法实验报告总结计划范文 PAGE 分子荧光光谱法实验报告范文 　　一、实验目的 　　1.掌握荧光光度计的基来源理及使用。 　　2.认识荧光分光光度计的结构和各构成部分的作用。 　　3.掌握分子荧光光度计剖析物质的特点荧光光谱：激发光谱、发射光谱的测定方法。 　　4.认识影响荧光产生的几个主要要素。 　　5.学会运用分子荧光光谱法对物质进行定性和定量剖析。 　　二、实验原理 　　原子外层电子汲取光子后，由基态跃迁到激发态，再回到较低能级或许基态时，发射出必定波长的辐射，称为原子荧光。关于分子的能级激发态称为分子荧光，平常所说的荧光指分子荧光。 　　拥有不饱和基团的基态分子经光照耀后，价电子跃迁产生荧光，是当电子从第一激发单重态S1的最低振动能级回到基态S0各振动能级所产生的光辐射。 　　(1)激发光谱 　　是指发光的某一谱线或谱带的强度随激发光波长(或频次)变化的曲线。横坐标为激发光波长，纵坐标为发光相对强度。 　　激发光谱反应不一样波长的光激发资料产生发光的成效。即表示发光的某一谱线或谱带能够被什么波长的光激发、激发的本事是高仍是低；也表示用不一样波长的光激发资料时，使资料发出某一波长光的效率。荧光为光致发光，适合的激发光波长需依据激发光谱确立——激发光谱是在固定荧光波长下，丈量荧光体的荧光强度随激发波长变化的光谱。获取方法：先把第二单色器的波长固定，使测定的λem不变，改变第一单色器波长，让不一样波长的光照在荧光物质上，测定它的荧光强度，以I为纵坐标，λex为横坐标所得图谱即荧光物质的激发光谱，从曲线上找出λex，，实质上选波长较长的高波长峰。 　　(2)发射光谱 　　是指发光的能量按波长或频次的散布。往常实验丈量的是发光的相对能量。发射光谱中，横坐标为波长（或频次），纵坐标为发光相对强度。 　　发射光谱常分为带谱和线谱，有时也会出现既有带谱、又有线谱的状况。发射光谱的获取方法：先把第一单色器的波长固定，使激发的λex不变，改变第二单色器波长，让不一样波长的光扫描，测定它的发光强度，以I为纵坐标，λem为横坐标得图谱即荧光物质的发射光谱;从曲线上找出最大的λem。 　　(3)荧光强度与荧光物质浓度的关系 　　用强度为I0的入射光，照耀到液池内的荧光物质时，产生荧光，荧光强度If用仪器测得，在荧光浓度很稀(A0.05)时，荧光物质发射的荧光强度If与浓度有下边的关系：If=KC。 　　三、实验试剂和仪器 　　试剂：罗丹明B乙醇溶液；1-萘酚乙醇溶液；3,3’-Diethyloxadicarbocyanineiodide：标准溶液，10μg/ml,20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml和未知浓度；蒸馏水；乙 　　醇。 　　仪器：Fluoromax-4荧光分光光度计；1cm比色皿；spectrofluorometer剖析软件。 　　荧光剖析仪器结构：它主要由光源、单色器、液槽、检测器和显示器构成。光源发出的紫外-可见或许红外光经过激发单色器分光后，照到荧光池中的被检测样品上，样品收到该激发光照耀后，发出的荧光经发射单色器分光，由光电倍增管变换成相应电信号，再经放大器放大反应进入变换单元，将模拟电信号变换成相应数字信号，并经过显示器或打印机显示和记录被测样品谱图。 　　四、实验步骤 　　1.样品制备。配置不一样浓度的3,3’-Diethyloxadicarbocyanineiodide溶液，分别为10μg/ml,20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml和未知浓度。 　　2.翻开荧光分光光度计和电脑，预热半个小时。 　　3.翻开spectrofluorometer剖析软件，进行有关参数的设置。第一检测罗丹明B的激发光谱，此时固定发射波长为560nm，检测并保留激发光谱。而后依据所检测的激发光谱中的最大峰值541nm来设置检测罗丹明B的荧光光谱的激发波长，检测并保留所得的荧光光谱。 　　4.检测1-萘酚的荧光光谱。方法同步骤3。 　　5.用已配置好的3,3’-Diethyloxadicarbocyanineiodide标准溶液进行与2中同样的步骤，找到最大激发波长与最大发射波长，以后选定单点检测模式，并设置成刚选择的最大激发波长与最大发射波长，分别对10μg/ml,20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml进行检测，记录数据，绘制工作曲线。 　　6.对未知浓度3,3’-Diethyloxadicarbocyanineiodide进行检测，记录数据，并依据工作曲线求出浓度。 　　五、数据记录和办理 　　1．数据记录 　　(1)罗丹明B的测定