枯草芽孢杆菌常用培养基配方.pdfVIP

枯草芽孢杆菌常用培养基配方 枯草芽孢杆菌常用培养基配方： 1l 蒸馏水 +20g 葡萄糖 +15g 蛋白胨 +5g 氯化钠 +0.5g 牛肉膏 +20g 琼脂 枯草芽孢杆菌原生质体的制备 1 培养枯草芽孢杆菌 取亲本菌株 t4412 、tt2 新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基 (cm) 的试管中， 36℃振荡 培养 14 h，各取 1 ml 菌液转接入装有 20 ml 液体完全培养基的 250 ml 锥形瓶中， 36℃振荡 培养 3 h，使细胞生长进入对数前期，各加入 25 u/ml 青霉素，使其终浓度为 u/ml ，继续振 荡培养 2 h 。 2. 收集细胞 各取菌液 10 ml ，4000 r/min 离心 10 min ，弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液中，离心。 如此洗涤两次，将菌体悬浮 10 ml smm 中，每 ml 约含 108～ 109 活菌为宜。 3. 总菌数测定 各取菌液 ml ，用生理盐水稀释，取 10-5、 10-6、10-7 各 1ml(每稀释度作两个平板 )、倾注完 全培养基， 36℃培养 24 h 后计数。此为未经酶处理的总菌数。 4. 脱壁 二株亲本菌株各取 5 ml 菌悬液，加入 5 ml 溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为 100 ug/ml ，混匀 后于 36℃水浴保温处理 30 min ，定时取样，镜检观察原生质体形成情况，当 95%以上细胞 变成球状原生质体时，用 4000 r/min 离心 10 min ，弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然 后将原生质体悬浮于 5 ml 高渗缓冲液中。立即进行剩余菌数的测定。 5. 剩余菌数测定 取 ml 上述原生质体悬液，用无菌水稀释，使原生质体裂解死亡，取 10-2、10-3、 10-4 稀 释液各 ml ，涂布于完全培养基平板上， 36℃培养 24～48 h ，生长出的菌落应是未被酶裂解 的剩余细胞。 计算酶处理后剩余细胞数，并分别计算二亲株的原生质体形成率。原生质体形成率＝未 经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数。