三七PnAAE41基因的克隆、表达分析及原核表达.docxVIP

? ? 三七PnAAE41基因的克隆、表达分析及原核表达 ? ? 闫静 向贵生 冯垒 杨梅 郭敏 张广辉 摘? 要：草酰輔酶A合成酶参与了三七主要止血活性成分三七素的生物合成，研究三七草酰辅酶A合成酶基因（PnAAE41）的分子特征及表达特征，从而完善三七素生物合成途径以及成分积累调控机制等方面的研究。以三七为实验材料，在前期转录组研究基础上，设计特异性引物，通过RT-PCR扩增获得1个三七AAE基因的cDNA全长。采用生物信息学方法分析其分子特性，通过qRT-PCR技术分析PnAAE41基因的时空表达特异性。通过异源表达探索进行PnAAE41最佳蛋白最佳的诱导条件的探索，随后以颜色反应作为定性研究的基础。序列分析结果表明，PnAAE41的开放阅读框长度为1572 bp，编码523个氨基酸，登录号为MW242343。系统进化分析显示，PnAAE41蛋白与拟南芥AtAAE蛋白亲缘关系最近。预测PnAAE41蛋白主要定位于细胞质膜上，不含信号肽序列，二级结构中α-螺旋和无规则卷曲占大部分比例。qRT-PCR分析表明，PnAAE41基因主要在根和茎中优势表达。异源表达最佳诱导条件为0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG），16 ℃诱导9 h，该蛋白对草酸具有催化作用。本研究结果为进一步深入研究AAE在三七素生物合成途径中的功能提供理论基础。 关键词：三七;草酰