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植物组织培养的一些注意事项 植物组织培养的一些注意事项 PAGE PAGE / NUMPAGESPAGE15 植物组织培养的一些注意事项 PAGE 植 物 组 织 培 养 的 一 些 注 意 事 项 一、常用培养基主要特征 1、高盐成分培养基包含MS、LS、BL、BM、ER等培养基。此中MS培养基应用最 宽泛,其钾盐、铵盐及硝酸盐含量均较高 , 微量元素种类齐备, 其养分数目及比 例均比较适合, 宽泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。 LS、BM、 ER培养基由MS培养基演变而来。 、硝酸钾含量较高的培养基包含B5、N6、LH、GS等培养基。 B5培养基B5培养基除含有较高的钾盐外,还含有较低的铵态氮和较高的盐酸硫胺素,较适合南洋杉、葡萄及豆科与十字花科植物等的培养。 ②N6培养基N6培养基(朱至清等1975)系我国学者创建,获国家发明二等奖, 合用于票据叶植物花药培养 , 柑橘花药培养也适合, 在楸树、针叶树等的组织培 养中使用成效也好。 ③SH培养基是 矿盐浓度较高的一种培养基 , 此中铵与磷酸是由磷酸二氢铵 (NH4H2PO4) 供给的, 这种培养基适合于某些票据叶及双子叶植物的培养。 、中等无机盐含量的培养基 ①H培养基本培养基大批元素约为 MS培养基的一半, 仅磷酸二氢钾及氯化钙稍 低,微量元素种类减少,而含量较MS为高,维生素种类比MS多。适于花药培养。 ②尼奇培养基(Niotsch1969)此培养基与H培养基成分基真同样,仅生物素比 H培养基高10倍。也适合于花药培养。 ③米勒培养基(Miller1963) 此培养基和Blaydes(1966) 培养基两者成分完整 同样。适合大豆愈伤组织培养和花药等培养用。 4、低无机盐培养基大多状况下用于生根培养基。有以下几种 : ①改进怀特培养基(White1963) WS培养基(WolterSkoog1966) ③克诺普液(Knop1965) 花卉培养上用得多。 ④贝尔什劳特液(Berthelot1934) HB培养基(HolleyBaker1963)此培养基在花卉脱毒培养和木本植物的茎 尖培养中成效优秀。其成分是大批元素比1/2克诺普(Knop)液稍多,微量元 素用贝尔什劳特液, 每升培养基中加0.5ml 。 二、与培养基有关的一些细节问题 1、培养基所用药品应采纳等级较高的化学纯 CP(三级) 及分极纯AR(二级), 以 免杂质对培养物造成不利影响。 2、调理PH也可用精细pH试纸(应在干燥器中保留, 免得吸湿而无效)。培养基过 酸的可用1mol/L 氢氧化钠(NaOH)来调理; 培养基过碱的可用1mol/L 盐酸 (HCl) 来调理(1mol/LNaOH 的配制方法是称40gNaOH,溶解后加入蒸馏水, 定容到1000ml即可。1mol/LHCl的配制方法是量取12mol/LHCl84ml, 加 水定容至1000ml)。经高压蒸汽灭菌后, 因为某些成分的分解(如蔗糖的分解) 或氧化,酸度会增添(pH值一般可降低0 .2)。有时玻璃器皿质量较差,此中 一部分物质溶解, 也会影响酸度的变化。这些在调整pH值时都要考虑进去。分 装后应立刻灭菌, 若因故不可以实时灭菌, 最好放入冰箱中在24h内达成灭菌工 作。灭菌时压力表读数为 0.8kg/cm 2～1.1kg/cm 2,121℃时保持15min～ 20min即可。 3、某些生长调理物质,如吲哚乙酸、玉米素及某些维生素等物质遇热不稳固,所以不可以进行高压灭菌,而需用过滤方法灭菌,经过滤灭菌的溶液,可在琼脂培养基温度降落到大概40℃时加入到已高压灭菌的培养基中。 4、配好的培养基可放到培养室中预培养 3d,若没有污染反响, 则证明是靠谱的, 能够使用。临时不用的培养基最好置于 10℃下保留, 含有生长调理物质的培养基 在4℃～5℃低温下保留则更理想。含吲哚乙酸或赤霉素的培养基应在配制一周内用完,其余培养基至多也不可以超出一个月。一般状况下,两周内应用完,免得干燥变质。 三、培养资料及消毒 1、取材季节的影响：大多半植物应在其生长开始的季节采样 , 生长末期或已进 入休眠期, 则外植体对引诱反响愚钝或无反响。 2、器官的生理状态和发育年纪：沿植物的主轴,越向上的部分所形成的器官其生长的时间越短,其生理年纪也越老,越凑近发育上的成熟,越易形成花器官。反之,越向下,其生理年纪越小。木本植物的组织培养中,以幼龄树的春梢嫩枝段或基部的萌条较好,下胚轴与拥有3对～4对真叶的嫩茎段,生长成效也较 好。一般状况下, 幼年组织比老年组织拥有较高的形态发生能力。 3、资料大小的影响：资料越小成活率越低 , 茎尖培养存活的临界大小应为一个 茎尖分生组织带1个～2个叶原基, 约0.2mm～0.3mm大小。叶片、花瓣等约 2 为5mm,茎段则