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蜗牛多糖的提取和免疫学活性研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：蜗牛多糖的提取和免疫学活性研究 1 1 器材与方法 2 2 结果 4 3 讨论 5 文2：蜗牛多糖的提取和免疫学活性研究 6 1 器材与方法 7 2 结果 9 3 讨论 10 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 蜗牛多糖的提取和免疫学活性研究 文1：蜗牛多糖的提取和免疫学活性研究 Extraction of Snail Polysaccharides and its Immunologic Study Abstract:ObjectiveTo extract Snail polysaccharides(SP) and study their immunologic activity. MethodsPolysaccharides were extracted from bradybaena kiangsieis by alkali method and effects of SP on immunity were investigated by haemolytic plaque assay, macrophage function assay, delayed type hypeeitivity reaction and splenic lymphocyte traformation assay in mice. ResultsSP strikingly increased haemolytic plaque, promoted macrophage function, enhanced delayed type hypeeitivity reaction, and remarkably raised splenic lymphocyte traformation efficiency in a dosedependent manner. ConclusioP is able to enhance immunity. Key words:Snail polysaccharides; Extraction; Immunologic Activity 蜗牛入药在我国 历史 悠久。公元6世纪陶弘景著《名医别录》和李时珍的《本草纲目》中已有蜗牛药方的详细论载。 现代 中医认为蜗牛味咸寒，入大肠、肺、肝、肾经，具有清热解毒、化痰消肿、平喘理疝之功效。民间亦有用蜗牛 治疗 肝炎的偏方。据报道，淡水和海洋贝类多糖具有抗病毒、抗肿瘤和增强机体免疫的作用［1，2］。由此我们认为陆生贝类蜗牛的以上功用可能与多糖有关。本实验从江西巴蜗牛（bradybaena kiangsieis）中提取出多糖，通过溶血空斑实验、巨噬细胞吞噬功能实验、迟发型变态反应和小鼠脾淋巴细胞转化实验［3］对蜗牛多糖(Snail Polysaccharide,SP）的免疫学活性进行研究。 1 器材与方法 材料 蜗牛多糖（SP）的提取 新鲜江西巴蜗牛清水洗净，取出软组织加入蒸馏水匀浆，离心（4 000 min，15 min），弃上清，加入5%的甲醇浸泡过夜，离心(4 000 min，15 min)， 弃上清，加入1% NaOH煮沸12 h，过滤除残渣，按滤液:正丁醇体积比1∶2加入正丁醇，反复萃取4次，1%活性炭脱色，加2倍体积的乙醇沉淀过夜，弃上清，Sevage法脱蛋白(氯仿与正丁醇体积比为4∶1反复萃取多次），加2倍体积乙醇沉淀过夜，弃上清，真空干燥，得白色粉末状蜗牛多糖。 试剂及仪器 RPMI 1640培养基、胎牛血清均为 Gibco产品；植物血凝素 PHA购自 Sigma公司；印度墨汁，德国 Chroma产品；绵羊红细胞 (SRBC)由健康成年绵羊静脉取血；其他试剂均为国产分析纯。CO2培养箱（INCO2L，德国 MEMMERT公司）；显微镜（BX60，日本 Olympus)；紫外分光光度计 (UV-160，日本)等。 动物 昆明种小鼠，13~15周龄，♀♂各半，质量为（20±2）g。 方法 分组 昆明种小鼠随机分成4组，每组10只。即对照组，SP低、中、高剂量组。SP的 ip剂量分别为50，100，200 mg#12539;kg-1，对照组 ip等量生理盐水 ( 溶血空斑实验 分组同上，SP连续 ip 10 d,末次给药24 h后每只小鼠 ip 4×108 /ml SRBC 1 ml,将 SRBC免疫4 d的小鼠颈椎脱臼法处死,取脾脏,加入 RPMI 1640液, 制成均匀悬液,通过200目钢丝网，RPMI1640液清洗2次，制成细胞悬液（5