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焦化作业工人淋巴细胞HSP70表达及作用 【摘要】 目的 探讨热应激蛋白70（HSP70）在焦炉工人外周血淋巴细胞的表达水平及其意义。方法 用微核试验和碱性单细胞凝胶电泳技术（彗星试验）检测淋巴细胞的染色体畸变和DNA损伤情况 ，用蛋白印迹（western blot）法检测淋巴细胞HSP70表达水平。结果 外周血淋巴细胞微核率和彗星尾长在高暴露组显著高于对照组，差异有统计学意义（Plt;0.05）；HSP70的表达水平在高暴露组、低暴露组和对照组分别为1.12±0.36,1.34±0.83,0.89±0.40，低暴露组明显高于对照组（Plt;0.05）；高暴露组工人的外周血淋巴细胞HSP70的表达水平与彗星尾长呈负相关（r=-0.416,P=0.03）。结论 焦炉作业环境可诱发外周血淋巴细胞HSP70蛋白表达，较高水平HSP70的表达对细胞DNA损伤具有保护作用。 　 【关键词】 焦炉工人 　　热应激蛋白(Heat Stress Proteins,HSPs)是生物体内一种高度保守的蛋白质，热应激蛋白70（Heat Stress Protein70,HSP70）是热应激蛋白家族中最保守和最重要的一族，在机体细胞耐受形成、机体免疫调节、基因调控、细胞增殖分化、肿瘤发生发展等过程中发挥重要的生物学功能〔1〕。有报道显示，多环芳烃也可能影响HSP70的表达，但结论不一〔2，3〕，其表达与多环芳烃引起的DNA损伤间的关系尚不清楚。本研究主要通过测定焦炉工人外调血淋巴细胞的染色体畸变和DNA损伤以及HSP70表达水平的变化，探讨以多环芳烃为主要暴露因素的焦化作业工人外周血淋巴细胞HSP70的表达特征以及在DNA损伤中的作用，为焦炉工人肺癌的早期诊断和预防及生物标志物的研究提供科学依据。 　　1 对象与方法 　　11 对象 选取某焦化厂焦炉作业工人49名为研究对象。工龄5年以上，年龄30～45岁，均为男性。按工作性质及环境监测结果，分为高暴露组30人（炉顶工、炉侧工）、低暴露组19人（炉底工）；选取距该焦化厂2km处的疾病预防控制中心31名男性工作人员为对照组，工龄、年龄相仿均无有毒有害作业接触史。 　　12 方法 （1）问卷调查：用由职业医学专家设计的统一调查表，按照统一的方法及标准，进行面对面询问调查。调查内容包括一般情况、身体状况、既往史、遗传史、职业史、生活环境、用药情况、营养调查、生活习惯等。（2）环境监测：采用个体采样方法进行采样。分别选取炉顶、炉侧、炉底和对照区工人各2名，随身携带HSF513型个体采样器（美国Gilian公司），流量2L/min，连续采样6h，每个工作区重复测定2次。采用Varian-Prostar高效液相色谱仪（美国Varian公司）检测苯并（a）芘［B(a)p］浓度。用干球温度计测定工人作业场所温度。（3）微核试验：取肘静脉血1ml，用甲基纤维素法制片，4℃冰箱甲醇固定5min,Giemsa染色10～15min，油镜下观察。计数1000只形态完整的淋巴细胞微核数，以‰表示。（4）碱性单细胞凝胶电泳（彗星试验）：参照文献［4］方法。按文献［5］方法分离淋巴细胞，制备单细胞悬液与等量质量浓度为1%的低熔点琼脂糖混合，包埋在磨砂玻片上制成凝胶板。经裂解、解旋、电泳、中和及脱水后以溴化乙锭（EB）进行染色，在荧光显微镜（日本Nikon公司）590nm波长的激发光下进行观察，每份样品记数50个细胞，用Comet IMI10软件测量尾长〔6〕。（5）蛋白印迹（Western-blotting）法：静脉采血，肝素抗凝，分离淋巴细胞，采用总蛋白定量试剂盒（美国Bio-Rad公司）进行总蛋白定量，调节蛋白浓度一致。其中一抗用兔抗人HSP70（美国Stressgen公司），4℃过夜，然后在磷酸盐缓冲液（PBS）中洗涤3次，每次15min；二抗为辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG（美国KPL公司），室温振荡1h，PBS洗涤3次，每次15min，电化学发光（ECL）发光剂（英国Amersham公司）显色。结果扫描保存，用Gelpro32分析软件进行定量分析。HSP70相对表达值的计算均以对照的blot积分吸光度值为基准，用其余各组blot积分吸光度值与对照的blot积分吸光度值之比值表示。 　　13 统计分析 应用SPSS100软件进行方差分析和相关分析。 　　2 结果 　　21 研究对象的一般情况 某焦化厂焦炉作业工人49名。其中，高暴露组30名，平均年龄（3973±174）岁，平均工龄（1924±386）年；吸烟者23名，占78%；饮酒者14名，占44%；低暴露组19名，平均年龄（3942±203）岁，平均工龄（1672±635）年，吸烟者15名，占79%；饮酒者9名，占46%。无任何有毒有害作业