慢性肾衰患者瘦素基因表达及蛋白表达与高瘦素血症的相关病因研究医学.docVIP

慢性肾衰患者瘦素基因表达及蛋白表达与高瘦素血症的相关病因研究医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：慢性肾衰患者瘦素基因表达及蛋白表达与高瘦素血症的相关病因研究医学 1 1材料和方法 2 文2：穴位埋线对肥胖大鼠瘦素及瘦素受体基因表达的影响医学 6 1 实验材料和方法 8 2 实验结果与分析 10 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 14 正文 慢性肾衰患者瘦素基因表达及蛋白表达与高瘦素血症的相关病因研究医学 文1：慢性肾衰患者瘦素基因表达及蛋白表达与高瘦素血症的相关病因研究医学 0引言 瘦素(leptin)是由瘦素基因编码的肽类激素，与啮齿类动物及人类的食欲和能量代谢有关. 高浓度的瘦素可使食欲下降和能量消耗增加. 尿毒症患者广泛存在食欲下降和营养不良，但肾脏替代 治疗 不能完全改善上述状况，有研究认为这与高瘦素血症有关,而高瘦素血症可能与肾小球滤过率（glomerular filtration rate，GFR）下降， 炎症， 高胰岛素血症有关［1］， 但尿毒症患者血清瘦素水平增加的真正原因却仍在探讨之中. 本研究旨在通过对慢性肾衰（chronic renal failure, CRF）患者血中瘦素水平及瘦素基因表达的变化进行研究， 同时寻找引起这些变化的原因. 1材料和方法 材料 150例患者中男89例，女61例， 均有不同程度肾损伤. 男性年龄（42±1）岁， 女性年龄（45±2）岁，其中原发性肾小球肾炎112例，慢性肾盂肾炎7例，多囊肾9例，糖尿病肾病17例，系统性红斑狼疮5例. 所有患者观察期间均停止使用类固醇及男性激素. GFR10 mL/min的患者采用血液透析治疗，2~3次/wk，4 h/次，碳酸盐透析液，血流量200~250 mL/min，透析液流量500 mL/min. 建议患者每日进食蛋白量为 g/kg,蛋白摄入量由尿素动力学控制，不控制日常能量摄入. 30例健康自愿者作为健康对照组，男17例，女13例，年龄（44±1）岁，体质量指数相匹配. 方法 ①取血当日测量身长、体质量,计算体质量指数（body mass index，BMI）(BMI=体质量÷身长2)，所有测量均由一人完成. ②在控制条件下，留24 h尿，于次日清晨空腹状态下采静脉血2 mL，在本院生化检验室检测内生肌酐清除率. ③于清晨空腹状态下采静脉血4 mL，血液透析患者透析前采血，取血后立即分离血清，置于-70℃冰箱中保存，待标本集齐后一次检测，检测血清瘦素浓度应用放射免疫分析法，试剂盒购于美国DSL公司. 一抗为兔抗人整分子瘦素的特异性多克隆抗血清，二抗为羊抗兔IgG血清. ELISA方法检测血清C反应蛋白（Creactive protein，CRP）（试剂盒购于美国Biochech公司）. 荧光偏振免疫分析法检测血清同型半光胺酸（total homocystein，tHcy）（试剂盒及荧光偏振免疫分析仪均为美国ABBOTT公司产品）. IMMVLITE180化学发光仪检测血清空腹胰岛素水平（fasting iulin，FI）. ④脂肪组织的获取：被测者禁食8h，15例维持性血液透析的终末期肾衰（endstage renal disease，ESRD）患者，男8例，年龄（±）岁，女7例，年龄（±）岁,均在进行肾移植手术切开腹部皮肤时取腹部脂肪2 cm3, 15例对照组均为腹腔镜下行胆囊切除术患者，BMI与15例ESRD患者相匹配，在手术时取腹部皮下脂肪2 cm3，脂肪组织立即液氮运送，-80℃保存待测. 另各取脂肪组织 cm3,福尔马林固定，脱水后石蜡封存，待行免疫组化检测. ⑤瘦素基因检测：用总RNA抽提试剂盒提取脂肪组织总RNA，操作步骤按说明书. ⑥UltraSeitiveTM SP免疫组化法检测脂肪瘦素的表达：将标本石蜡块作5 μm厚的连续切片， 烤片， 脱蜡至水， 微波修复； 加入一抗体溶液， 1∶100兔抗人瘦素多克隆抗体Ob（A20）(Santa Cruz，USA)，二抗体溶液，即用型免疫组化超敏UltraSeitiveTMSP试剂盒（鼠/兔）（KIT9710,福州迈新生物技术开发公司），阳性显色为棕色. 以PBS和一抗来源血清代替一抗作为阴性对照，以健康对照组腹部白色脂肪组织作为瘦素的阳性对照，每组切片随机选取5个区域,每个区域包含100个同类细胞,计量阳性结果,取平均数作为每张切片的阳性细胞数. 统计学处理：所有数据采用x±s表示. 组间比较采用方差分析或非参数秩和检验. 配对及组内比较采用配对的t检验. 指标间的相关性采用秩相关进行分析. P表示有统计学差异. 2结果 肾脏患者瘦