拟apoE对小鼠蛛网膜下腔出血及脑血管痉挛的治疗作用.docVIP

拟apoE对小鼠蛛网膜下腔出血及脑血管痉挛的治疗作用 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：拟apoE对小鼠蛛网膜下腔出血及脑血管痉挛的治疗作用 1 1材料和方法 2 文2：经颅直流电对痉挛的治疗作用研究进展 6 一、tDCS作用机制 7 二、tDCS治疗痉挛的研究现状 8 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 10 正文 拟apoE对小鼠蛛网膜下腔出血及脑血管痉挛的治疗作用 文1：拟apoE对小鼠蛛网膜下腔出血及脑血管痉挛的治疗作用 载脂蛋白E（apoliopoprotein E， apoE）在中枢神经系统的生理、病理作用越来越受到重视. 完整的apoE分子量大，正常状态下不能通过血脑屏障，限制了其作为外源性药物的治疗性应用［1］. 内源性apoE或脑室内注射apoE全蛋白通过下调中枢神经系统炎症反应、减轻氧化应激、抗兴奋性氨基酸毒性、直接增加神经营养等作用发挥神经保护作用［2］拟apoE（133149）是体外重组来自apoE受体结合区的一个17肽，外源性给药能透过血脑屏障，同时保留了apoE全蛋白的许多特性［3-4］. 但有关体外重组apoE片断用于SAH的治疗性研究，目前国内外还少见报道. 蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage, SAH）患者脑脊液apoE水平下降，提示apoE与SAH的病理机制有关［5-6］. 本研究采用静脉给药，旨在探讨拟apoE1410对实验性SAH及脑血管痉挛是否具有治疗作用. 1材料和方法 材料 拟apoE1410的合成：拟apoE1410， cetylASAibLRKLAibKRLLamide，12肽，分子量：1410D. 由北卡罗来纳州立大学肽合成实验室合成. Leica手术显微镜（德国Leica公司）；显微手术用器械，包括弯头手术镊，手术剪刀，阻血夹及其持器等（瑞士）. 小动物呼吸机，麻醉机，血气分析仪（美国Harvard公司）；转棒仪（意大利Ugo Basile公司）；图像采集及图像分析系统(加拿大图像研究公司，型号MCIDM5)；脑血管灌注装置，灌注胶（杜克大学多学科神经保护实验室） 方法 动物分组及SAH模型制备 C57BL6/J L雄性小鼠55只，12～14 wk. 随机分为4组：假手术组（4只）；SAH（SAH+盐水）组（21只）；低剂量（SAH＋apoE1410 ， mg/kg）组（14只）和 高剂量（SAH＋apoE1410， mg/kg）组（16只）. 将小鼠气管插管，连接呼吸机，监测血压、血气和体温，控制在生理状态，显微手术戳破大脑中动脉(middle cerebral artery，MCA)和大脑前动脉(anterior cerebral artery，ACA)分叉处造成SAH模型. 拟apoE1410溶于PBS，经尾静脉注射，SAH术后30 min开始第一次，每12 h 一次，共用3 d，其它两组只注射生理盐水. 神经功能检测评分 参考 文献 ［7］的方法进行. 神经行为学主要检测动物的面、颈部触觉，足掌痛觉，自由活动，双前肢对称性，攀爬能力，平衡运动能力等. 检测总分为3～21分. 其中运动功能检测0～12分，感觉功能检测3～9分. 转棒实验应用 转棒仪检测小鼠左右肢体的协调能力、平衡能力、体力与耐力等综合运动能力. 该仪器由一根直径为3 cm的转棒和齿轮传送系统以及数显系统构成，在电力推动下进行加速度转动，最高转数为300转/分. 在手术前一天上午（分组之前），对所有小鼠进行训练. 将小鼠放置在静止的转棒上，开动机器，开始加速度转动，小鼠可能会掉落，重新放回转棒，共重新放回转棒3次. 休息10 min之后，进行第2次训练，同样的训练共进行3次. 获取基数值：在上午接受3次训练之后，下午取每1只鼠的基数值. 在转棒静止状态，将小鼠轻轻放在转棒上，开动机器，开始加速度转动，记录小鼠掉落的时间，或者记录当小鼠四肢抱住转棒，不能走动达到2圈，即360度时的时间，单位为秒（s），共测定3次，每次之间至少间隔10 min，取其均值为手术前的基数. 训练的目的是让所有实验组的小鼠均接受同样的学习训练，每只鼠的基数虽有微小差别，但可以视为相同. 术后第2日开始，每日进行1次，共3 d. 具体做法与取得基数时一致. 脑血管铸型及脑血管直径的测量 术后72 h行脑血管灌注，测量伤侧MCA距与ACA分叉处 mm处的直径. 出血等级的判定 参考文献［7］的方法进行. SAH术后72 h，判定出血等级. 将脑血管铸型的标本放置于生理盐水中，手术显微镜下放大6倍，进行出血等级的判定. 以出血块的面积和出血块的密度为依据将