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椒目油对大鼠气道重建的防治作用 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：椒目油对大鼠气道重建的防治作用 1 1材料和方法 2 Ⅲ型胶原的表达 4 文2：赖氨酸对大鼠骨质疏松的防治作用 6 1 材料与方法 7 2 结果 8 3 讨论 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 椒目油对大鼠气道重建的防治作用 文1：椒目油对大鼠气道重建的防治作用 中药椒目治疗支气管哮喘 历史 悠久，具有很好的疗效，目前国内许多单位相继开展了椒目治疗哮喘研究，取得一定成果［1］. 从国内大量的 文献 报道以及研究成果显示，无论从分子生物学的角度或是从临床的角度都说明了椒目能有效治疗哮喘.但是椒目是否能有效地防止气道重建，目前还少见报道.为此我们进行了这方面研究，以探讨椒目油对气道重建的影响. 1材料和方法 材料 健康雄性SD大鼠30只，体质量200～250 g（第四军医大学实验动物中心）；椒目油（第四军医大学西京 医院 药剂科，批号：）；卵白蛋白(ovalbumin, OVA，美国Sigma公司）；超声雾化器(上海鱼跃医疗设备有限公司)；SP2000彩色图像分析系统(上海世珈医疗设备有限公司)；小鼠抗大鼠Ⅲ型胶原, 增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）多克隆抗体， SABC 免疫组化试剂盒(武汉博士德生物有限公司) 方法 分组 将大鼠随机分为3组：哮喘组，治疗组和对照组，每组大鼠各10只. 模型建立 参考 文献［2］的方法，用10 g/L OVA和10 g/L氢氧化铝溶液 mL大鼠腹腔注射和 mL前腿内侧皮下注射，第8日重复注射1次，至15 d开始吸入10 g/L OVA溶液激发5 min. 10 g/L 的OVA溶液需每日配制，雾化时将大鼠置于特制塑料容器内雾化吸人.治疗组在雾化激发后1 h给予椒目油和熟精油的混合物(按1：1混合)，以3 mL/kg灌胃.对照组以生理盐水代替OVA致敏和雾化. 大鼠气管和支气管病理组织 观察3组大鼠在激发3 mo后处死并制作病理标本. 经右主支气管注入100 mL/L的中性甲醛溶液10 mL至肺适度膨胀，将右肺连同右主支气管剪下放入100 mL/L 中性甲醛固定7 d.从右侧下肺叶开口处以水平位取材，制成石蜡切片， 行HE染色作病理观察.HE染色切片放大100倍，选择R mm，横断面完整的小支气管测量气道内周长(Pi)和最大直径上相对的两个管壁厚度(T1, T2)，计算(T1+T2)/Pi. 免疫组化检测 PCNA和Ⅲ型胶原含量用ABC法，以PBS代替一抗作为空白对照,小鼠抗大鼠Ⅲ型胶原抗体工作浓度为1∶100.组织切片按序以PBS漂洗，300 mL/L羊血清，一抗、二抗孵育后浸入ABC液中1 h，取出经PBS，Tris HCl缓冲液漂洗，再以DAB显色，苏木精复染，常规脱水，透明、封盖.每例标本取2张切片，每张切片随机选取直径在100～200 pm的小支气管5支，应用彩色图像分析系统测定黏膜下层吸光度确定Ⅲ型胶原的含量，以平均吸光度(A值)表示，取其平均值作为测定值. 统计学处理： 实验数据用x±s表示，应用SPSS 软件进行t检验分析，P为差异具有统计学意义. 2结果 肺组织HE染色及嗜性粒细胞浸润 哮喘组大鼠肺切片HE染色可见支气管上皮细胞肿胀、脱落，管壁增厚，管腔变窄，管壁内及管周有大量炎性细胞浸润，以嗜酸性粒细胞和淋巴细胞为主；治疗组大鼠的肺组织可见支气管上皮细胞的炎症反应较哮喘组为轻，支气管壁及管腔内的炎症细胞也大为减少；对照组大鼠的肺组织则无上述改变. 大鼠支气管平滑肌厚度的变化 哮喘组(图1A)大鼠哮喘组大鼠气道壁厚度较对照组明显增加(P)， 治疗 组(图1B)大鼠气道壁厚度较哮喘组明显降低(P)，但与对照组（图1C）相比仍较高(P，表1).表1Ⅲ型胶原在支气管肺组织的阳性表达及支气管平滑肌厚度的变化(略） Ⅲ型胶原的表达 各组动物气道及其周围肺组织均可见呈深棕色圆形颗粒的Ⅲ型胶原阳性反应细胞,主要分布在气道壁黏膜下层. 灰度分析结果显示哮喘组表达明显高于对照组，治疗组低于哮喘组略高于对照组(P，表1) 表达的变化 各组动物气道及其周围肺组织均可见染色呈棕黑色圆形颗粒的PCNA蛋白阳性反应细胞.分布于上皮下基底膜、平滑肌细胞及外周成纤维细胞.哮喘组阳性细胞颗粒数目及灰度明显高于对照组(P)；治疗组明显低于哮喘组(P)，略高于对照组( P) 3讨论 气道重建又称气道重塑或重构［3］，它是哮喘病理特征之一，哮喘气道重建是一个集合性术语，特指哮喘患者气道壁结构的改变不同于正常气道组织学改变，在哮喘患者