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正交实验法筛选千斤拔多糖的提取分离工艺 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：正交实验法筛选千斤拔多糖的提取分离工艺 1 1 材料与仪器 2 2 方法 3 3 结果 4 4 讨论 7 文2：杜仲内生真菌发酵产物多糖的体外细胞毒活性筛选 8 1 材料 9 2 实验方法 9 3 实验结果 10 4 讨论 11 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 正交实验法筛选千斤拔多糖的提取分离工艺 文1：正交实验法筛选千斤拔多糖的提取分离工艺 常见妇科疾病以经前期综合征、阴道炎症、乳腺增生三大疾病最为明显，其中阴道炎症为常见和多发妇科疾病，严重影响患者的生活质量。目前市面上 治疗 效果和销量较好的妇科千金片对阴道炎症有良好的治疗作用，为女性妇科炎症首选药物。千斤拔为其君药。《 中国 药典》2005版Ⅰ部中收载千斤拔为豆科植物蔓性千斤拔Moghania philippineis(Merr. et Rolfe)Li.、大叶千斤拔Moghania macrophylla(Willd.)或绣毛千斤拔Moghania ferruginea( Benth.)Li.的干燥根［1］，用于治疗风湿痹痛、腰腿痛、风湿关节炎、腰肌劳损、阳痿、遗精、妇科病、乳房疾病等病症［2］。蔓性千斤拔、大叶千斤拔分布较广，主产于江西、福建、 台湾 、湖北、湖南、广西、广东、四川等省区 ［3］。 文献 报道千斤拔含有多糖、黄酮、生物碱、β-谷甾醇等多种成分［2］。多糖是一类天然大分子物质, 多糖参与了细胞各种生命活动的调节。大量的药理和临床研究表明植物多糖类化合物是一种免疫调节剂, 它具有激活免疫细胞、改善机体免疫功能等作用［4］。《中国药典》尚未收载千斤拔的质量标准，目前未见有关千斤拔多糖成分的研究报道。本文分别考察了不同提取方法、不同浓度、时间、物料比条件下提取千斤拔多糖的工艺，以期为安全、可控、有效地利用该药材和新药开发研究打下坚实的 科学 基础。 1 材料与仪器 UV-752分光光度计(上海第三分析仪器厂)；SHB-3循环多用真空泵（郑州杜甫仪器厂）；旋转蒸发仪（SENCO系列）（上海申生科技有限公司）；hh-2数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）；hctp11b5托盘天平（北京医用天平厂）；正德牌远红外可控调温电炉（成都市聚焱电器厂）；DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；KQ-250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。(+)葡萄糖(AR，105 ℃干燥至恒重)；其他试剂均为分析纯。千斤拔药材购于成都药材市场，经刘圆博士鉴定为蔓性千斤拔Moghania philippineis(Merr. et Rolfe)Li.的根。苯酚试剂［5］: 取苯酚（CP）150 g，加铝片 g和碳酸氢钠 g，蒸馏，收集182 ℃馏份。称取10 g，加水200 ml溶解，置棕色瓶内放冰箱中备用。 2 方法 以改良苯酚-硫酸法［5］ 测定千斤拔多糖的含量。 线性关系考察 葡萄糖标准溶液的制备精密称取干燥至恒重的葡萄糖标准品70 mg，用水稀释成为700 μg·ml-1的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液 ，， ，， ， ， ml置50 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，再精密吸取 ml于具塞试管中。各管精密加入 %苯酚溶液［3］ ml，摇匀，迅速分别滴加浓硫酸 ml，摇匀后放置5 min，置沸水浴中加热15 min，取出冷至室温后，于490 nm处测定吸光度值。以浓度C(μg·ml-1)为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：A= 6 8,r = 6 (n=6)。结果表明，在～ μg·ml-1之间，葡萄糖浓度与吸收度值具有良好的线性关系。 粗多糖样品溶液的制备精密吸取定容后的粗多糖溶液20 ml置100 ml容量瓶中，稀释至刻度，精密吸取2 ml显色，备用。 精密度（重复性）实验取同一样品（S1）溶液，重复测定吸光度6次，D为 %。结果表明方法精密度（重复性）良好。 稳定性实验取样品溶液，每隔 h测定吸光度值，连续4 h，D为 %。结果表明样品稳定性良好。 加样回收实验精密称取已知多糖含量的粗多糖溶液1 ml，3份，依次加入不同量的葡萄糖对照品溶液，取“”项下的对照品溶液，按“”项下测吸光度供试品溶液的制备方法，自“各管精密加入 %苯酚溶液 ml”起，依法操作，测得样品吸光度值，根据标准曲线求多糖的含量，并以葡萄糖标准溶液作对比测定， 计算 多糖回收率为 %，D为%（n=9） 提取物中多糖含量测定精密吸取定容后的粗多糖溶液20 ml置100 ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，精密量取 ml