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妍婷颗粒对LPS诱导小鼠脾细胞产生IL1β的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：妍婷颗粒对LPS诱导小鼠脾细胞产生IL1β的影响 1 1 器材 2 2 方法 2 3 结果 4 4 讨论 4 文2：牛磺酸对LPS诱导小鼠急性肺损伤的治疗效果 6 参考文摘引言： 8 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 10 正文 妍婷颗粒对LPS诱导小鼠脾细胞产生IL1β的影响 文1：妍婷颗粒对LPS诱导小鼠脾细胞产生IL1β的影响 妍婷颗粒方为导师侯丽辉教授多年临床经验与中医理论相结合， 总结 出的 治疗 慢性盆腔炎的经验方，已在临床广泛应用多年，且疗效显著。慢性盆腔炎是妇科常见病、多发病，有缠绵不愈、易于复发的特点，近年其发病率呈上升趋势，因此对慢性盆腔炎的认识与研究日益广泛和深入。IL-1具有广泛的免疫调节、致热、介导炎症等作用，是慢性盆腔炎发生 发展 的一种重要细胞因子。本研究观测妍婷颗粒对LPS诱导小鼠脾细胞产生IL-1β的影响，从分子免疫学角度探讨妍婷颗粒治疗慢性盆腔炎的机理和有效性。 1 器材 仪器与试剂超净工作台（苏州净化）， 二氧化碳培养箱（SHEL·LAB）， 台式高速离心机(BECKMAN)， 电热鼓风干燥箱（天津泰斯特）， AB204型 电子 天平(Sartorius)，磁力加热搅拌器78-1（江苏金坛）， 双蒸水馏器(MILLI-Q)，752型分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）， PCR仪(Eppendorf), 稳压稳流电泳仪（北京市六一仪器厂） 改良型RPMI-1640培养液(Hyclone)，胎牛血清（杭州四季青），D-PBS（北京中山金桥）， LPS (Sigma)，Trizol(Lnvitrogen), 引物(Sangon), 氯仿（天津市天大化学试剂厂），异丙醇（天津市恒兴化学试剂制造有限公司），琼脂糖(Solarbio)，PCR所需试剂购自Promega及TakaRa公司，ELISA试剂盒（北京北方生物技术研究所） 动物6～8周龄昆明雌性小鼠，体重20～25 g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。 药物 妍婷颗粒方组成：丹参、赤芍、元胡、三棱、莪术、红藤、败酱草、皂刺、川楝子。药物来源于黑龙江中医药大学附属第一 医院 制剂室，制成中药颗粒剂，蒸馏水溶解，最后浓缩含生药浓度为 g/ml。 2 方法 含药血清的制备取体重20～25 g的正常昆明雌性小鼠，按人鼠体重比换算后，以妍婷颗粒方灌胃（20 ml/kg，约相当于成人用量的7倍），2次/d ，连续3 d，最后1次给药后2 h，颈动脉取血，以2 000 min离心5 min，分离血清，并于57℃灭活（30 min），－20℃冻存备用［1］ 小鼠脾细胞的分离培养小鼠颈椎脱位处死，置75%乙醇中浸泡3～5 min，仰卧位，无菌取脾脏，用D-PBS液冲洗，置于平皿中，移入超净工作台，再以滤过的D-PBS快速、充分洗涤后，置于烧杯上的200目不锈钢网，将脾组织用眼科剪剪成小块，用注射器芯研磨脾，至脾呈白色絮状，D-PBS液冲洗过滤脾细胞，收集细胞悬液无菌离心管中，1 500 min离心10 min，使细胞沉淀，弃上清，再以D-PBS液洗涤细胞2次，RPMI-1640培养液洗涤细胞1次(均以1 500 min离心10 min)。以RPMI-1640培养液（含10%胎牛血清，含有青霉素、链霉素各100 u/ ml）悬浮细胞，%台盼蓝染色显示活力，细胞存活数大于90%，调整细胞密度，按1×106/ml密度接种细胞，置37℃，5%CO2培养箱中培养。培养12 h后加LPS及不同浓度妍婷颗粒进行干预（LPS浓度为10 μg／ml［2］；妍婷颗粒浓度分别为培养基的5%，10%，20%［1］ 实验分组实验分组为正常组；LPS处理组（10 μg／ml）；5%妍婷颗粒＋LPS处理组；10%妍婷颗粒＋LPS处理组；20%妍婷颗粒＋LPS处理组。 实验检测给予LPS及妍婷颗粒干预24 h［3］后收集上清及细胞。 培养液上清中IL-1β含量测定收集上清液－20℃冰箱保存，按ELISA试剂盒说明进行检测。 RT-PCR法检测细胞中IL-1β mRNA的表达用Trizol提取细胞总RNA,测总RNA纯度和含量,逆转录成cDNA, IL-1β的上游引物为:5＇-AGG CTC CGA GAT GAA CAA-3＇；下游引物为: 5＇-AAG GCA TTA GAA ACA GTC C-3＇, 产物长度为464bp, PCR总反应体为25μl。扩增条件为：95℃预变性5 min，然后在90℃ 30 s，℃ 30 s，72℃ 30s条件下循环30～35次，最后72℃延伸10 min。