糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因Slc4a1mRNA表达的影响.docVIP

糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因Slc4a1mRNA表达的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因Slc4a1mRNA表达的影响 1 1 材料 2 2 方法与结果 2 3 讨论 4 文2：格列齐特对糖尿病大鼠心肌ATP敏感性钾通道mRNA表达的影响 6 1材料和方法 6 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因Slc4a1mRNA表达的影响 文1：糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因Slc4a1mRNA表达的影响 载体家族4阴离子交换体成员糖尿病心肌损伤系糖尿病（DM）常见慢性并发症之一，其病变可以是原发的，也可继发于冠状动脉供血障碍，且心肌病变出现较早，主要表现为心肌舒张和收缩功能障碍，易发生充血性心力衰竭。其确切的病理机制尚未彻底阐明，临床尚无特效药物，而中医药在防治该病方面很有潜力，但因其病理机制复杂，其状态的描述和中药复方多成分、多环节、多靶点的作用机制，又是传统单因素研究理论与方法难以解决的，为此借助分子生物学研究方法，采用基因芯片技术，利用目前国际学术界公认的Affymetrix 公司生产的Rat 基因芯片，寻找糖尿病心肌病相关基因，探讨糖尿病心肌病分子生物学机制, 阐释中药复方糖心康治疗糖尿病心肌病的作用机理，对STZ诱导DM大鼠的心脏基因表达谱进行了研究，并对筛选出的差异表达基因用Eve green实时荧光RT-PCR技术检测其在大鼠心脏组织中的含量及表达水平。本文仅报告糖心康对糖尿病心肌病大鼠心肌组织基因Slc4a1 mRNA表达的影响。 1 材料 试剂和药品链脲佐菌素（STZ，CALBIOCHEM，USA）；糖心康为黑龙江中医药大学附属第一 医院 制剂室制作；Rat 基因芯片（AFFYMETRIX，USA） 动物造模及分组Wistar大鼠，雄性，体重200～230 g，除空白对照组外，余者以25 mg·kg-1 STZ左下腹腔注射，造模成功后，再随机分为模型组和治疗组。各组均喂以高热量饲料。 2 方法与结果 给药方法治疗组以中药糖心康灌胃，空白组及模型组以生理盐水灌胃。 标本采集快速用180 ℃、12 h处理过的手术剪刀摘取心脏，立即用预冷的生理盐水冲洗，冲洗后在冰上操作，沿心室长轴切取心肌，置于液氮中冻存，以备提取RNA使用。 心肌组织差异表达基因的筛选 总RNA提取从各组大鼠中取心脏, 使用QIAGENs RNAeasy Total RNA Isolation Kit抽提总RNA，由纯化的总RNA合成双链cDNA，经PLG提取、乙醇沉淀将双链cDNA纯化，用BioArray High Yield RNA Tracript Labeling Kit方法以生物素标记cRNA合成，QIAGEN Rneasy Colum法体外转录纯化生物素标记的cRNA，用分光光度计分析RNA浓度进行质控，凝胶电泳检测IVT产物，片断化cRNA，合成cRNA 探针。 基因芯片的杂交、洗脱、染色及检测合成好的cRNA探针经片段化处理后用于与基因芯片杂交。基因芯片为Affymetrix　Rat 基因表达谱芯片，芯片的杂交、洗脱、染色及检测利用Affymetrix公司生产的专用设备“基因芯片检测工作站”（work station）进行，操作过程均按该公司推荐的条件进行。 基因芯片检测数据的处理芯片扫描数据应用“Affymetrix Microarray Suite software ”进行数据处理。 结果筛选标准说明：差异基因筛选标准为change为I或MI，ratio或＝1，实验组Detection为P的为上调基因，change为D或MD，ratio或＝-1，对照组Detection为P的为下调基因。 散点图X轴为对照组信号值，Y轴为实验组信号值，图中红色点为实验组和对照组该基因的Detection均为P，蓝色为两组中有一个值不是P，而黄色点为两组均为A（图1～4） 按照比较严格的条件筛选出差异表达基因，表达差异2倍以上的基因列表，包括基因名称、GenBank号、Uni号和染色体定位。其中，BE113640: solute carrier family 4, anion exchanger, member 1，溶质载体家族4阴离子交换体成员1（又称带3蛋白），在糖尿病大鼠心肌组织表达下调，糖心康治疗组表达上调。 荧光定量RT-PCR检测心肌组织Slc4a1mRNA的表达采用Eve green法，see primer: 5/ AGGCAATGCACGTCGTCTTTCC-3′，length: 22 bp， Tm值: ℃；anti-see