基因表达调控与重组技术.ppt

* 第三节 重组DNA技术 第五十五页，共78页 操纵子结构 编码序列 启动序列 操纵序列 其他调节序列 (promoter) (operator) P O (coding sequence) 第二十三页，共78页 原核生物启动序列（启动子） RNA转录起始 -35区 -10区 TTGACA TTAACT TTTACA TATGAT TTTACA TATGTT TTGATA TATAAT CTGACG TACTGT N17 N16 N17 N16 N16 N7 N7 N6 N7 N6 A A A A A trp tRNATyr lac recA Ara BAD TTGACA TATAAT 一致序列 第二十四页，共78页 （2）调节蛋白 特异因子 决定RNA聚合酶特异识别并结合 启动序列的能力（σ因子） 阻遏蛋白 与操纵序列结合，抑制RNA聚合酶活性 （负性调节） 激活蛋白 促进RNA聚合酶活性（正性调节） 第二十五页，共78页 （3） RNA聚合酶活性 DNA元件与调节蛋白对转录激活的调节作用最终由RNA聚合酶活性体现。 启动序列或启动子的结构、调节蛋白的性质对RNA聚合酶活性影响最大。 第二十六页，共78页 2. 真核生物 （1） 顺式作用元件： （2） 反式作用因子： （3） mRNA转录激活及其调节 第二十七页，共78页 * 第二节 原核基因表达调控与真核基因表达调控的基本原理 第二十八页，共78页 * 一、原核基因表达及其调控的特点 1、转录与翻译两过程紧密偶联 3、操纵子调节机制中普遍存在阻遏蛋白介导 的负性调节* 2、普遍存在操纵子调节机制 阻遏蛋白 操纵序列 结合 阻遏 解聚 结合 去阻遏 阻碍 第二十九页，共78页 4、转录产物为多顺反子mRNA 5、转录起始是基因表达调控的最关键环节* 多顺反子mRNA：多个功能相关的基因串联， 转录产物在 一条mRNA上，翻译产物为多个多肽链 第三十页，共78页 * 二、操纵子理论 通常一个操纵子含有一个启动序列及数个编码基因（2～6个，甚至更多），还有其它调节序列。 编码序列 启动序列 操纵序列 其他调节序列 (promoter) (operator) P O (coding sequence) 操纵子结构 第三十一页，共78页 * 乳糖操纵子调节机制 阻遏蛋白的负性调节 CAP的正性调节 协调调节 第三十二页，共78页 乳糖操纵子结构 CAP结合位点 P I I P O Z Y A 调控区 结构基因 I: 阻遏蛋白编码基因　PI: 阻遏蛋白基因启动序列　 Z: β-半乳糖苷酶　 Y: 透酶　 A: 乙酰基转移酶 结构基因 O:操纵序列（阻遏蛋白结合部位）　 P:启动序列 CAP结合位点 调控区 第三十三页，共78页 1. 阻遏蛋白的负性调节（无乳糖） * 阻遏蛋白与O序列结合, 抑制转录, lac操纵子关闭 阻遏蛋白 mRNA CAP结合位点 P I I P O Z Y A RNA聚合酶 第三十四页，共78页 诱导剂结合于阻遏蛋白，阻遏蛋白与O序列解离，转录抑制解除，lac操纵子开启 乳糖 别乳糖 CAP结合位点 P I I P O Z Y A mRNA 阻遏蛋白的负性调节（有乳糖） * 第三十五页，共78页 CAP: 分解代谢基因激活蛋白 catabolite gene activator protein 同二聚体 cAMP 结合区 DNA 结合区 第三十六页，共78页 2. CAP的正性调节（无葡萄糖） * cAMP CAP蛋白 P I I P O Z Y A CAP结合位点 mRNA 无葡萄糖， cAMP浓度高 cAMP与CAP结合 与CAP结合位点结合 转录活性提高约50倍 第三十七页，共78页 CAP的正性调节（有葡萄糖） * cAMP CAP蛋白 P I I P O Z Y A CAP结合位点 mRNA 有葡萄糖， cAMP浓度低 cAMP与CAP结合受阻 转录活性下降 第三十八页，共78页 阻遏蛋白 mRNA CAP结合位点 P I I P O Z Y A RNA聚合酶 3. 阻遏蛋白与CAP的协调调节* （1）无乳糖时, 阻遏蛋白封闭转录， CAP无作用 第三十九页，共78页 （2）