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角质形成细胞凋亡的分子机制 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：角质形成细胞凋亡的分子机制 1 1 控制角质形成细胞凋亡的调控通路及调控因子 2 2 角质形成细胞的递呈抗原作用 5 3 展望 6 文2：氟尿嘧啶影响人大肠癌细胞增殖及凋亡的分子机制 6 1 材料与方法 7 1 .4 流式细胞术检测 9 2 结果 11 3 讨论 13 参考文摘引言： 15 原创性声明（模板） 16 文章致谢（模板） 17 正文 角质形成细胞凋亡的分子机制 文1：角质形成细胞凋亡的分子机制 角质形成细胞(keratinocyte， KC)是人皮肤表皮的主要细胞， 在表皮基底细胞层至角质层的分化过程中， KC最后失去细胞核及相应的细胞器， 目前很多学者认为KC的分化实际上是一种特殊的细胞凋亡。 角化是角质形成细胞的一个重要特征， 在此过程中产生一系列特征性形态学变化： 角蛋白细丝从基底层开始积累、 聚集直至最终充满整个无核的角质细胞； 透明角质颗粒在颗粒层出现； 板层小体（lamellar body）从棘层上部出现并逐渐向细胞周边移动，在颗粒层与细胞膜融合并将内容物排出至细胞间；细胞套膜（cell envelope，CE）从颗粒层开始在质膜下逐步形成并最终取代质膜，其生物化学变化极其复杂。从分子生物学角度讲， 角化是KC分化特异性分子有序表达、相互作用和衍变的结果。长期以来KC被认为只起到机械的屏障作用。80年代发现KC能分泌IL1后，各国学者陆续发现KC尚能分泌多种细胞因子(IL3， IL6， IL7，IL8， IL10， IL11， IL12， IL13，IL15， TNFα， TGFα，TGFβ， GMCSF， GCSF， MCSF，VEGF，bFGF，PDGF，POMC，αMSH，MGSA等)，故KC可能在细胞的其他生理功能中起到重要作用，并且与皮肤病的发病密切相关[1] 1 控制角质形成细胞凋亡的调控通路及调控因子 1．1 许多生理和病理性细胞死亡的信号传递可激活由遗传调控的细胞程序性死亡传导旁路而诱导凋亡。由Fas介导的细胞凋亡信号的传递主要是经：caspase 8(caspase，又称半胱天冬酶) 和ceramide(神经酰胺)介导的线粒体细胞色素C两种主要级连反应途经实现的。凋亡相关的细胞内信号传导旁路迄今尚未完全阐明。何春涤等[2]对正常人角质形成细胞、HaCaT细胞和皮肤鳞状细胞癌细胞等细胞系凋亡相关基因及蛋白的表达进行了研究 。通过培养正常人的KC和永生化的人KC系HaCaT、皮肤鳞状细胞癌细胞系(SCL1，SCC12，SCC13)、上皮样癌A431细胞系等，同时用结直肠癌细胞系SW480和黑素瘤细胞系MeWo作对照；结果在培养的正常人KC、永生化的人KC系HaCaT、皮肤鳞状细胞癌细胞系( SCL1，SCC12 ，SCC13)、上皮样癌A431细胞系等，结直肠癌细胞系SW480和黑素瘤细胞系MeWo中均观察到 CD95 mRNA的表达。仅在作为阳性对照的结直肠癌细胞系SW480观察到CD95L mRNA的表达 ，而在其他所有的细胞培养中均未见其表达。在所检测的培养细胞中，Bax特异性PCR产物表达强度变化不大，而Bcl2 mRNA的表达却明显不同。还同时应用了内部和外部两套不同的检测BclXL和BclXs引物，发现抑制凋 亡的BclXL mRNA表达总是强于BclXs mRNA的表达。应用内部BclX引物，在培养的正常人KC，HaCaT，A431等细胞系中，意外发现一条短的DNA片段，而在SW480和MeWo细胞系中却未见相同的DNA片段。应用免疫印迹(western blot)技术，用抗FasL的单抗，在培养的人KC，永生化的人KC系HaCaT亦未见其表达FasL蛋白，而在已证实的结直肠癌细胞系SW480可见FasL蛋 白表达。应用RTPCR技术，在培养的人KC及HaCaT细胞系可见Fas mRNA的表达而未见FasL mRNA的表达。应用转基因技术，将Bcl2基因转入HaCaT细胞系内；并应用细胞培养技术，分子生物学及免疫印迹等技术，用FasL(CD95L)拮抗性单抗CH11及C2神经酰胺(C2ceramide)，诱导转入Bcl2基因的HaCaT细胞的凋亡，并检测其凋亡的差异；同时检测细胞胞浆内和分离的线粒体内细胞色素C的含量；发现HaCaT细胞经Fas介导的细胞凋亡信号的传递主要是经caspase 8而不是经ceramide介导的线粒体细胞色素 C途径。 1．2 原癌基因cmyc具有调节细胞凋亡和增殖两个截然相反过程的作用，细胞最