基因工程基本流程筛选与鉴定.pptVIP

A B A或B * 第三十一页，共55页 不同克隆的酶切结果 * 第三十二页，共55页 选择过程 * 第三十三页，共55页 8. DNA序列测定 原理： 通过对插入片段序列的测定确定是否是所需的重组子 * 第三十四页，共55页 选择过程 双脱氧末端终止法 化学降解法 焦磷酸降解法 高通量Solexa测序 …… * 第三十五页，共55页 * 第三十六页，共55页 基于外源基因表达产物的筛选与鉴定 1. 蛋白质功能检测 原理： 外源基因编码具有特殊功能的酶或活性蛋白，根据抗原抗体反应原理，针对该表达产物设计相应的检测方案 针对表达载体的检测方法 * 第三十七页，共55页 待测基因 产物蛋白 一抗 二抗 125I 标记的二 抗结合蛋白 固相支持滤膜 待测基因 产物蛋白 一抗 125I标记的二抗 固相支持滤膜 待测基因 产物蛋白 一抗 固相支持滤膜 固相支持滤膜 待测基因 产物蛋白 一抗 二抗 125I 标记的二抗 结合蛋白 125I标记的二抗 * 第三十八页，共55页 选择过程 弥补缺陷 转化进来的外源基因产物能够弥补受体菌株的突变型缺陷。 his- his+ 受体菌： 外源基因： 在不含组氨酸的培养基中生长 * 第三十九页，共55页 第一页，共55页 1. 抗药性筛选法 pBR322质粒上有两个抗生素抗性基因: Tetr和Ampr。 Tetr上有插入位点B