基因工程基本流程获取目的基因.pptVIP

原理： 羟基磷灰石柱 结合DNA-RNA或DNA-DNA双链，不结合单链DNA。 （Hydroxylapatite column） 扣除杂交 * 第三十一页，共66页 从表达A蛋白和不表达A蛋白的组织细胞中分别提取和分离总mRNA。 将表达A蛋白的mRNA合成cDNA第一链。再同不表达A蛋白的总mRNA杂交成cDNA-mRNA双链。 不能杂交的cDNA就包括特异表达的A基因的cDNA单链。 用羟磷灰石柱收集单链cDNA，合成为双链DNA进行扩增、克隆、测序。 * 第三十二页，共66页 A A A组织 B组织 总mRNA（A） 总mRNA（B） 含蛋白A的mRNA 不含蛋白A的mRNA 总cDNA第一链 A 杂交 内含蛋白A 的cDNA 羟磷灰石柱 过柱 吸收RNA-DNA 单链滤过 羟磷灰石柱 B A * 第三十三页，共66页 PCR扩增法 使用PCR法克隆目的基因的前提条件是： 已知待扩增目的基因或DNA片段两侧的序列，根据该序列化学合成聚合反应必需的双引物。 The National Center for Biotechnology Information/NCBI?: /genbank European Bioinformatics Institute/EMBL-EBI: http://www.ebi.ac.uk/ DNA Data Bank of Japan