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缺血性脑血管疾病患者血浆利钾尿肽水平增加及临床意义 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：缺血性脑血管疾病患者血浆利钾尿肽水平增加及临床意义 1 1　　资料与方法 2 2　　结果 3 文2：胃癌患者血浆p53Kras基因突变及临床意义 4 1 材料与方法 5 2 结 果 6 3 讨 论 7 参考文摘引言： 8 原创性声明（模板） 9 文章致谢（模板） 9 正文 缺血性脑血管疾病患者血浆利钾尿肽水平增加及临床意义 文1：缺血性脑血管疾病患者血浆利钾尿肽水平增加及临床意义 KP是同心钠素（ANP）来源于同一前体分子—心钠素前体（Pro-ANP）的活性多肽。ANP及其他前体肽均来源于由126个氨基酸所构成的Pro-ANP。ANP是指在Pro-ANP羧基端经过水解后得到的99～126位氨基酸所组成的肽链。Pro-ANP氨基端的片段在水解为1～98片段之后再进一步水解为1～30；31～67；68～78和79～98。目前已经明确结构生物学活性的多肽片段主要有三个，其中Pro-ANP1-30称为长效利钠刺激因子（long-acting sodium stimulator）；Pro-ANP31-67称为血管舒张因子（vessel dilator）；Pro-ANP79-98称利钾尿肽（kaliuretic peptide，KP）［1］，它们不仅具有同ANP一样的利尿、利钠、排钾以及降低血压的生理作用，而且作用时间比ANP长，效力比ANP大，其中KP具有最强的抑制肾皮质和髓质NA+-K+-ATP酶活性的作用［2］。本研究的目的在于探讨KP在ICVD中的临床意义。 1　　资料与方法 ICVD组　　30例ICVD患者均是我院2006年6～10月住院患者，诊断按照全国第四届脑血管疾病学术会议通过的各类脑血管疾病诊断要点［3］，并全部经头颅CT扫描确诊。30例中，男20例，女10例，年龄45～82岁，平均±岁。所有病例均行电解质、肝功、肾功、胸片及心电图检查，部分患者行超声心动图检查，以排除心脏疾病的影响。 对照组　　24例，男10例，女14例，年龄45～75岁，平均±岁，均为我院门诊体检的健康成年人。 标本的采集与测定方法　　ICVD组患者分别于发病后7天内抽血留取标本。ICVD组和对照组均于清晨空腹采取静脉血3ml，注入含10%EDTA和抑肽酶各30μl的试管中，混匀，3000rpm离心10min，分离血浆，-80℃冰箱待测KP。 实验方法 ［125I］-Kp的制备　　5μg KP（美国Phoenix Pharm INC）, 加入含10μg iodogen （sigma） 的试管中，再加入37GBq的Na［125I］，反应4min，取出反应物即终止反应，将其直接移至反向C18高压液相层析柱上（×30cm），用20%～60%乙腈（含有%三氟乙酸）梯液洗脱，速率为/min, 得到放射比活为/mol的KP标记物，使用时，用/L，的PBS（内含1g/L BSA，1g/L NaN3，1g/L NaCl，%TritoX-100）（放免缓冲液）稀释成工作浓液。 KP的放免分析　　取上述留取的大鼠和人的血浆100μl，加入免抗人KP抗血清100μl（Phoenix Pharm，INC），在4℃下孵育过夜，再加入100μl［125I］-KP（15000cpm/管）。再于4℃下孵育24h，加入500μl PR分离剂（东亚免疫技术研究所），混匀室温放置15min，4℃，3000min 离心20min，取沉淀作γ 计数，再根据同时用KP标准品 （Phoenix Pharm，INC）配制的标准曲线 计算 出样品的KP含有量，此标准曲线测定范围是～/L，非特异结合6%，批间、批内变异系数分别是（±）%（n=5）和（±）%（n=10）。KP抗血清具有很强的特异性，与ANP、内皮素、降钙素基因相关肽及AⅡ均无交叉反应。 ANP的放免分析　　血浆样品的ANP含量采用东亚免疫技术研究提供的心钠素放免药盒，依说明书测定完成。 统计学处理　　结果数据以均数±标准差（〖x〗±s）表示，数据分析用t检验。 2　　结果 30例ICVD患者血浆KP含量±/ml，与对照组±/ml比较显著增加（P）。3　　讨论KP是同ANP来源于同一前体分子—心钠素前体（Pro-ANP）的活性多肽，KP是前体分子水解后位于79～98位氨基酸的片段，而ANP是99～126位氨基酸的肽链。KP合成同ANP（99～126）一样，主要是在心房进行的，合成后的多肽贮存在心肌细胞的贮藏颗粒之中，受到释刺激因素如血容增加，心房扩张及钠负荷增加等刺激时释入血，随血液循环，分布至全身［2］。KP不仅具有利尿、利钠、排钾以及降低血压的