突变型人APP基因与增强型绿色荧光蛋白基因融合载体的构建.docVIP

突变型人APP基因与增强型绿色荧光蛋白基因融合载体的构建 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 2 文1：突变型人APP基因与增强型绿色荧光蛋白基因融合载体的构建 2 1 材料与方法 3 2 结 果 4 3 讨 论 5 文2：突变型人胰岛素原基因的克隆及其腺病毒载体的构建 6 1 材料和方法 7 1．1 材料 7 1．2 方法 7 1．2．1 引物设计 7 1．2．2 野生型人胰岛素原基因的获得 8 1．2．3 突变型人胰岛素原基因的获得 8 1．2．4 穿梭腺病毒载体的构建 9 Ⅰ酶切鉴定。 9 1．2．5 重组腺病毒载体的构建 9 2 结果 10 2．1 野生型人胰岛素原基因的扩增 10 2．2 人胰岛素原基因的定点突变 10 2．3 穿梭腺病毒载体的构建 10 2．4 重组腺病毒载体的构建 11 3 讨论 11 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 14 正文 突变型人APP基因与增强型绿色荧光蛋白基因融合载体的构建 文1：突变型人APP基因与增强型绿色荧光蛋白基因融合载体的构建 【Abstract】 Objective To cotruct and express a recombinant vector bearing fusion gene of human amyloid precuor protein (APP)695 mutant gene and enhanced fluorescence protein (EGFP) fusion gene. Methods The prime were designed according to the sequences of APP695 gene found from NCBI. Then the mutant APP695 was amplifed by PCR with pCB6 carrying wild human APP695 and acting as a template, the gene of mutant APP695 was ligated to pIRES2EGFP .The recombinant plasmid of pIRES2EGFP/APP695 mutant was verfied by checking sequences. Results The exact sequences of pIRES2EGFP/APP695 mutant vector were confirmed by digestion of restriction endonucleases, PCR and sequencing. Conclusio The pIRES2EGFPAPP695 mutant fusion gene recombination has been cotructed successfully, which lays the foundation for further research of AD pathogenesis and screening new drug targets on AD therapy. 【Key words】 Swedish mutant APP695；EGFP；Fusion gene of human APP695/ EGFP ; Vector 淀粉样前体蛋白(amyloid precuor protein，APP)基因是Alzheimer病(AD)已发现的诸多相关基因之一。 APP基因某些位点的突变可以引发某些家族的早发性AD，故APP的突变在AD发病中的作用引起了广泛关注。本研究应用增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein，EGFP)作为报告基因，将APP695突变基因与其融合，构建突变型APP695EGFP融合基因载体，为进一步研究APP695突变在AD发病中的作用，以及筛选对AD有治疗作用的药物奠定基础。 1 材料与方法 材料 携带野生型人类APP695的pCB6质粒，由美国加利福尼亚大学细胞分子医学院许华熙博士惠赠。携带EGFP的pIRES2质粒载体，由潍坊医学院免疫学教研室保存，DH5α感受态细胞为潍坊医学院免疫学实验室冻存。NheⅠ、HindⅢ、SmaⅠ、XbaⅠ等限制性内切酶，T4DNA连接酶与TaqDNA聚合酶，引物等均购自上海生工生物工程技术服务公司。 方法 pIRES2EGFPAPP695融合基因重组质粒的构建 将携带