高迁移率蛋白B1与活化T细胞核因子2协同促进白细胞介素2报告基因转录表达临床医学.docVIP

高迁移率蛋白B1与活化T细胞核因子2协同促进白细胞介素2报告基因转录表达临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：高迁移率蛋白B1与活化T细胞核因子2协同促进白细胞介素2报告基因转录表达临床医学 2 1 主要试剂 3 2 基因序列 3 3 细胞转染 3 4 荧光素酶和β半乳糖苷酶(βgal)活性测定 4 6 实验分组及过程 4 7 统计学处理 5 1 构建HMGB1及NFAT2真核表达质粒 5 2 293T细胞中的活性检测及蛋白表达 6 3 Hela细胞中的活性检测及蛋白表达 6 文2：白细胞介素2治疗恶性胸腔积液疗效分析临床医学 9 1 资料与方法 9 2 结果 10 3 讨论 10 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 13 正文 高迁移率蛋白B1与活化T细胞核因子2协同促进白细胞介素2报告基因转录表达临床医学 文1：高迁移率蛋白B1与活化T细胞核因子2协同促进白细胞介素2报告基因转录表达临床医学 Abstract: Objective To investigate the molecular mechanism of interleukin(IL)2 production facilitated by high mobility group box1 protein(HMGB1).Methods Eukaryotic expression plasmid HMGB1 and nuclear factor of activated T cells2(NFAT2) were trafected into 293T or Hela cells respectively or gene activity of IL2 was detected and regulation between HMGB1 and NFAT2 was Reporter gene activity of IL2 increased by times induced by solotrafection of HMGB1 or NFAT2 in 293T cells，while increased by times induced by co-trafection of HMGB1 and NFAT2 in 293T the other hand, reporter gene activity increased by times induced by solotrafection of HMGB1 or NFAT2 in Hela cells,while increased by times by cotrafection of HMGB1 and HMGB1 acts as a coactivator of NFAT2 in promoting IL2 tracription. Key words:high mobility group box1;nuclear factor of activated T cell;interleukin2;immunity 高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1 protein,HMGB1)是一大类高度保守的非组蛋白DNA结合蛋白，不仅广泛存在于真核细胞的细胞核内，对DNA复制、转录、重组和修复具有重要作用，而且可作为一种新的“晚期”炎症递质由单核/巨噬细胞分泌到细胞外参与炎症反应[1，2]。新近研究表明，HMGB1不仅与创伤后炎症反应密切相关，还可作为一种免疫调节因子引起淋巴细胞激活并释放白细胞介素(IL)2，诱导树突状细胞活化并分泌IL12[3，4]。我们前期实验证实，重组HMGB1可诱导淋巴细胞凋亡，并影响活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)的入核启动基因转录和IL2表达[4]。但是，关于HMGB1以何种机制影响T淋巴细胞合成释放IL2还不明确，其确切信号转导途径尚缺乏研究。由于NFAT2是淋巴细胞内控制IL2表达的关键调控因子[5]，本实验中笔者构建HMGB1和HMGB1的真核表达质粒，与IL2报告基因共同转染细胞系，探讨NFAT2能否介导HMGB1促进IL2表达的免疫效应。 材料与方法 1 主要试剂 真核表达载体pcDNA3、人乳腺文库、大肠杆菌DH5α菌株及含Flag标签的pcDNA3质粒由军事医学 科学 院八所七室保存;含人全长NFAT2的质粒由华盛顿大学Feng Ch