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DEPC水的配制和保留
DEPC水的配制和保留
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DEPC水的配制和保留
DEPC 水是用 DEPC(diethypyrocarbonate,焦碳酸二乙酯 )办理过并经高温高
压消毒 的 M i l i Q 纯水 。 经检测不 含 RN ase 、 D N ase 和 pr ot ei nase。
DEPC 水能够用于 RNA 积淀的溶解,含有 RNA 的各样反响系统如反转录、
siRNA 的退火等,以及其余各样要求无 RNase、DNase 和 proteinase的反响系统。
DEPC 水一般是指千分之一浓度的 DEPC,在搅拌器上搅拌至完整溶解, 即看不到 “油珠 ”为止,用来办理枪头、 EP 管的 DEPC 水不需高压灭活,而用于配制 DEPC 酒精等试剂和用来这类 RNA 有关试验的 DEPC 水需灭火后使用。
DEPC 气味芬芳浓郁,强挥发性,有毒,需在通风橱中操作。
方法是:取市售 DEPC?1ml,加入 1L 待办理水(蒸馏水等)中,经剧烈振摇后,于室温静止数小时, 而后高压灭菌, 以除掉降解 DEPC(DEPC 分解为 CO2 和乙醇)。有些试剂 ?可直接加入 DEPC,终浓度一般为 0.1%~0.4%,原则上在
杂交及其从前的步骤中,全部液体试剂均需用 DEPC 办理,或用 DEPC 水配制,包含乙醇的 ?稀释。别的,接触标本以及标本有关的空中的清洗也需 DEPC 水洗
涤。
注意:① DEPC 是?潜伏的致癌物质, 在操作中应尽量在通风的条件下进行,并防止接触皮肤。 ② 含有 Tris 缓冲液的溶液中,不可以加入 DEPC。
去离子纯净水加入 DEPC 达浓度 0.1%,室温下连续搅拌留宿,分瓶包装后湿热高压灭菌完全挥发去除 DEPC 后能够长久保留在室温或 4 度冰箱,不宜频频使用。
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