绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆与表达.docx

分子生物学综合实验论文 题 目 : 绿色荧光蛋白 (GFP)的基因克隆及表达 中国·黄石 2010 年 12 月 绿色荧光蛋白（ GFP） 基因的克隆与表达 胡丽丹 （湖北师范学院生命科学院 0803 班 湖北 黄石 43500 ） 摘要： 绿色荧光蛋白（ GFP）是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物 体内的生物发光蛋白。用碱裂解法提取的的质粒 pEGFP-N3 和 pET-28α经过 BamH I 和 Not I 双酶切连接后，得到 pET-28α-pEGFP-N3 重组质粒。取部分的重 组质粒做酶切实验， 验证重组质粒的存在性， 剩下的重组质粒导入表达菌 E. coLi BL-21 大肠杆菌感受态细胞中。 重组有 GFP基因的 E. coLi BL-21，在含有 1 μL/mL 的卡纳霉素的 LB 培养基上培养。 当 A600达到 0.7 时， 用终浓度为 0.8 mM 的异丙 基硫代 - β-D- 半乳糖苷 （IPTG）诱导培养 3 小时， 离心得到下层绿蓝色沉淀物即 可。 关键词： 绿色荧光蛋白 GFP 基因的克隆 荧光蛋白 水母 CLoning and Expression of