TORCH试剂盒操作演示教学讲义.ppt

美德声TORCH试剂盒操作演示 1.IgM试验操作 1. 试剂盒从冰箱取出，室温下放置20-30分钟，恢复到常温。 3.配制抗原抗体酶复合物 1.9ml抗原稀释液 冻干抗原粉 抗原稀释液 酶结合物 100微升酶结合物 混匀 混匀 复合物配制好要一个小时后才能用哦！最好在加样前配好 配好后没用完的复合物要放在-20℃保存 4.制备洗涤液 我是洗液，根据用量把我进行20倍稀释就好了 5.加样 按以下表格加入样本、阴阳性对照及标准品 1 2 3 4 A 空白 样本3 样本11 B 阴性对照 样本4 C 阴性对照 样本5 D 标准品 样本6 E 标准品 样本7 F 阳性对照 样本8 G 样本1 样本9 H 样本2 样本10 不要把我们弄错哦 注：标准品用瓶身上标记的量的蒸馏水溶解，阴阳性对照不用稀释，直接可用 黄色的是阴性对照 标准品 绿色的是阳性对照 6.第一次孵育 37℃，孵育60min 7.洗 板 每个微孔用350μ洗液，洗5次 8.加入抗原抗体酶结合物 除了空白孔外，每个微孔内加入100微升之前配制的抗原抗体酶结合物。 9第二次孵育 跟第一次孵育一样，还是37℃，孵育60分钟 10.洗板 跟第一次洗板一样，还是每个微孔用350μ洗液，洗5次 11.加入色原/底物 每一个微孔内加入100微升，室温下避光孵育20分钟。 注：计时要从加第一个孔时开始哦！ 12.加入终止液 也是每孔加100微升 终止液可是硫酸哦，使用时要小心！ 13.酶标仪读数 在450nm和620-630nm波长处判读结果，阳性结果可做确认实验进行确认。 结果判读 质控组判断：符合以下判断表示试验过程可靠： ①A1为空白孔，其OD值＜0.05 ②B1,C1孔阴性对照OD平均值小于0.15；CV值＜30% ③标准品S/Co＞1.5 ④阳性对照OD值＞0.75 结果判断： Cut-off值=阴性对照平均值+0.25 S/Co＜1.0 阴性结果 1.0＜S/Co＜1.2 灰区 S/Co＞1.2 阳性结果 二、 确认试验 1.样本稀释、抗原抗体酶复合物（以下称A液）配制跟刚才是一样的。 唯一不同的是酶复合物的配制（以下称B液） 用抗原稀释液对酶结合物进行20倍稀释就行。不需要再加入任何抗原物质！ 2.按下表加样 1 2 3 4 A 空白 样本3 样本7 B 阴性对照 样本4 C 阴性对照 样本4 D 样本1 样本5 E 样本1 样本5 F 样本2 样本6 G 样本2 样本6 H 样本3 样本7 3.孵育、洗板 37℃孵育60分钟，然后洗板。（同刚才的试验是一样的） 4.按下表加入酶复合物 1 2 3 4 A 空白 样本3（加B液） 样本7（加B液） B 阴性对照(加A液) 样本4 （加A液） C 阴性对照(加A液) 样本4（加B液） D 样本1（加A液） 样本5 （加A液） E 样本1（加B液） 样本5（加B液） F 样本2 （加A液） 样本6 （加A液） G 样本2（加B液） 样本6（加B液） H 样本3 （加A液） 样本7 （加A液） 剩下操作和刚才的试验一样 孵育 60min 洗板