第04章药物定量分析与分析方法验证.pptVIP

特点及要求： 外标法不使用校正因子，准确性较高， 操作条件变化对结果准确性影响较大。 对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试样的快速分析。 基本原理 各组分在固定相与载气之间由于分配系数不同而按不同顺序被带出，分配系数小的组分先流出，分配系数大的后流出 以气体为流动相的色谱法 气相色谱法（GC） 优点 灵敏度高、样品用量少 分离效能高，分离速度快 缺点 受样品蒸气压的限制 不适于难气化和热稳定的药物 光谱分析法 利用物质的光谱特性进行定量 介绍两种光谱分析方法： 紫外－可见分光光度法 分子的价电子吸收了光的能量，由低能量的基态跃迁到高能量的激发态，在相应波长位置出现吸收带形成的光谱，称为紫外-可见吸收光谱 紫外吸收光谱图 紫外－可见分光光度法 波长范围200－760nm 定量分析基本原理：朗伯-比尔定律 A=ECL 特点：灵敏度高(10-4～10-7 g/mL)； 准确度高； 仪器便宜；易操作 （一）对溶剂的要求 A尽量小 （二）空白对照试验 清零 （三）测定波长确证 ±2nm （四）供试液的浓度 A=0.3~0.7 吸收度的测定要求 √ 含量测定 吸收系数法（不需要对照品） 测定λ处吸收度，以该品种在规定条件下的吸收系数计算 含量％＝ ×100％ √ 盐酸氯丙嗪含量测定:精密称取0.2368g，置500ml量瓶中，加盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，加同一溶剂稀释至刻度，摇匀，在254nm波长处测得吸收度为0.435，按为915计算，求其百分含量。 例 含量测定 对照品比较法:配制供试品溶液和对照品溶液，测定λ处吸收度 C待测＝C对照× 含量％＝ ×100％ 要求浓度与吸光度成正比， 因此供试品与对照品溶液中的被测成分应尽可能一致（实际要求 ±10%） 含量测定 标准曲线法（多点对照） 绘制对照液浓度－吸光度标准曲线（3-5点） 拟合回归方程，求出供试液浓度 标准曲线 计算分光光度法 多波长校正计算分光光度法 双波长分光光度法 三波长分光光度法 导数光谱法 解联立方程法 荧光分析法 荧光 处于第一激发态的分子， 跃迁回基态时发射的光称为荧光，其能量小于激发光，波长长于激发光； 除去激发光源，荧光立即熄灭 荧光激发光谱（激发光谱） 荧光发射光谱（荧光光谱） 荧光为发射光，利用荧光的物理特性进行定性与定量测定的方法称为荧光分析法 （激发光谱） （发射光谱） 原理 当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件一定时，在较稀浓度范围内药物的荧光强度与溶液中该物质的浓度成正比 荧光强度∝浓度 特点：灵敏度较紫外高、选择性好 (10-10～10-12 g/mL)； 取样少、方法快速； 应在低浓度下进行； 干扰因素较多，须进行空白校正； 能产生荧光的物质较少，可采用荧光 衍生化处理 含量测定 对照品比较法 由于绝对荧光强度难以测定，需要在每次测定前用一定浓度的对照品溶液校正仪器灵敏度，然后读取对照品溶液、供试品溶液及各自溶剂的空白读数。 C待测＝C对照× 由于浓度线性范围较窄， 应在0.5～2.0之间 色谱分析法 是一种分离分析方法 利用各组分在固定相和流动相之间分配系数的差异得到分离，再逐个进行分析 介绍两种色谱分析方法： 高效液相色谱法（HPLC） 气相色谱法（GC） 固定相 色谱过程 流动相 被分离组分 保留时间——定性 进样点 t0死时间 tR保留时间 tR保留时间 峰面积（或峰高）——定量 色谱的保留行为 类 型 特 点 HPLC GC 分离效能高 （理论板数 n） 104～105 填充柱 103 毛细管柱=106 分析速度快 几分钟～几十分钟 几分钟～几十分钟 灵敏度高 （最小检出量） UVD 10-9g FD 10-13g TCD 10-8g FID 10-13g 适用范围宽 80%有机化合物 20%有机化合物 仪器化程度高 智能化 智能化 高效液相色谱法（HPLC） 固定相、流动相及检测器的选择 常用系统 固定相（色谱柱）：十八烷基键合硅胶C18 流动相：甲醇-水、乙腈-水 检测器：紫外吸收检测器 十八烷基及其他化学键合硅胶结构示意图 蒲 公 英 图 分析型色谱柱 各种类型色谱柱 色谱柱 内径：4.